【摘 要】
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(1R,4S)-2-氮杂双环-[2.2.1]-庚烷-5-烯-3-酮(以下简称(-)γ-内酰胺)是合成抗艾滋病药物阿巴卡韦(abacavir)的原料,微生物酶法拆分(+/-)γ-内酰胺生产(-)-丫-内酰胺具有良好
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(1R,4S)-2-氮杂双环-[2.2.1]-庚烷-5-烯-3-酮(以下简称(-)γ-内酰胺)是合成抗艾滋病药物阿巴卡韦(abacavir)的原料,微生物酶法拆分(+/-)γ-内酰胺生产(-)-丫-内酰胺具有良好的应用前景。以N-乙酰苯丙氨酸为唯一碳源,从土壤分离得到了800余株能在选择性平板上生长的菌株,经茚三酮法从中筛选得到了69株具有酰胺水解酶活性的菌株。利用液相色谱分析方法确定了其中的20株有较高的酰胺水解酶活性,利用手性液相色谱分析的方法进一步筛选得到了一株能立体选择性拆分(+/-)γ-内酰胺得到(-)γ-内酰胺的菌株L29-9。对L29-9的产酶培养基的碳、氮源及初始pH值等进行了初步研究。结果表明：当选择碳源柠檬酸2g/L、氮源酵母提取物5g/L、pH7.0、温度30℃、培养时间40h时,通过完整细胞转化,在30℃下经过12h的反应,产物(-)γ-内酰胺产率达40%,ee值99.5%。提取菌株L29-9基因组DNA为模板,采用通用引物进行PCR扩增,然后测定16s RNA序列。在NCBI进行序列比对,初步确定L29-9为Microbacterium hydrocarbonoxydans。
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