转Bt基因水稻对龟纹瓢虫的潜在影响

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转基因抗虫作物的利用是作物害虫防治技术的一次巨大绿色变革。其为人类带来利益的同时,也可能带来生态风险问题。其中,转基因抗虫作物对农田非靶标节肢动物可能带来的生态影响,一直是研究关注的焦点。龟纹瓢虫是多种农业生态系统中十分常见的捕食性天敌昆虫,除了捕食猎物,还有取食花粉的习性。这样,在转基因抗虫作物田,龟纹瓢虫可能通过取食猎物或花粉而暴露于转基因作物产生的外源杀虫蛋白。因此,在转基因抗虫作物,如Bt水稻商业化种植前,评价其对该捕食性昆虫的潜在影响十分必要。本文主要研究了龟纹瓢虫的饲喂方法和杀虫化合物对其毒性影响。首先采用油菜花粉混合杀虫化合物饲养龟纹瓢虫,并进行生物测定,明确了其对龟纹瓢虫生长发育的影响和毒力测定效果。主要研究内容及结果:1)使用油菜花粉结合大豆蚜虫饲喂龟纹瓢虫,可以满足龟纹瓢虫生长发育。利用油菜花粉建立了可用于检测不同杀虫化合物对龟纹瓢虫潜在影响的技术体系。2)利用蛋白酶抑制剂E-64作为阳性化合物验证了所建生物测定体系的有效性。结果表明:取食E-64处理的油菜花粉,龟纹瓢虫的存活率、化蛹率、羽化率、发育历期及成虫体重等生命参数均受到负面影响,且影响随E-64剂量的提高而加重。3)采用所建立的生物测定体系,评价了Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1F、Cry1C和Cry2A纯蛋白对龟纹瓢虫的潜在毒性,以E-64处理作为阳性对照。结果表明:五种Bt蛋白对龟纹瓢虫的存活率和发育历期等生命参数没有影响。4)以非转基因亲本MH63水稻花粉作为对照,评价了转Bt基因水稻新品系(T2A-1和T1C-19b)对龟纹瓢虫的潜在影响。结果表明:取食Bt水稻花粉导致龟纹瓢虫幼虫发育历期有所延长,可能是转Bt水稻花粉和对照水稻花粉在营养成分方面有所差异的结果,但还需要开展进一步的研究证实。5)通过酶联免疫试验(ELISA),明确了转基因水稻花粉的Bt蛋白表达量以及生测试验中龟纹瓢虫的Cry蛋白取食量;通过敏感昆虫生物测定试验,明确了生测试验中所用Cry蛋白的生物活性。结果表明:Bt蛋白在水稻花粉中具有较高的表达量;试验中龟纹瓢虫取食了高剂量的Bt蛋白;Bt蛋白在整个试验过程中能够保持较高的生物活性。本研究表明,Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1F、Cry1C和Cry2A对龟纹瓢虫没有毒性影响。虽然取食表达Cry1C和Cry2A蛋白的转Bt基因水稻花粉,使龟纹瓢虫的幼虫发育历期有所延长,但对其存活率和繁殖能力没有不良影响,因此,转cry2A和cry1C基因水稻的种植不会对龟纹瓢虫的生长发育产生负面影响。
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