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目的：依据基因BANK中基因序列设计相应引物克隆出人干扰素a-2b基因序列,构建多种重组人干扰素a-2b的原核分泌型表达载体,转化至大肠杆菌BL21和大肠杆菌W3110的感受态细胞中。分析不同宿主细菌对目标蛋白的表达量和分泌效率的影响,经SDS-PAGE, Western blot等手段鉴定获得较为理想重组人干扰素a-2b的原核分泌型工程菌株pPSIFN-4L/E. coli W3110。方法：根据大肠杆菌编码基因密码子的偏爱性原则,在不改变huIFN-α2b原有氨基酸序列的前提下,定向突变huIFN-α2b编码基因5’端得序列并且PCR扩增出huIFN-α2b’基因,克隆至pGEM7zf(-)中,转化大肠杆菌DH5a感受态细胞,经蓝-白斑筛选及测序验证正确；设计引物从大肠杆菌基因组中克隆出STⅡ信号肽基因序列,用同样方法验证正确。利用重叠PCR技术实现STⅡ信号肽基因和huIFN-a2b’基因的融合,再分别引入酶切位点BamHⅠ/SalⅠ,NdeⅠ/HindⅢ以及NsiⅠ/XhoⅠ将融合基因片段STⅡ-huIFN-α2b’克隆至载体pCSE、pET-22b和pPAK4L中,构建分泌型表达载体pCSIFN、pESIFN-22b和pPSIFN-4L。pCSIFN转入大肠杆菌W3110,pESIFN-22b转入大肠杆菌BL21,pPSIFN-4L分别转入大肠杆菌BL21和大肠杆菌W3110。诱导表达目标蛋白,将表达产物进行SDS-PAGE,使用Western Blot免疫印迹法分析验证并用WISH-VSV系统细胞病变抑制法(CPE)来测定表达的目标蛋白抗病毒活性及其效价。结果：融合基因在载体pCSE中表达量很低,其中约有50%的目标蛋白能够成功实现分泌。在E.coli BL21中,pET-22b经过IPTG诱导可以实现huIFNa-2b的高表达,但在分泌过程中ST II信号肽不能被有效切除。含有phoA启动子的载体pPAK4L其在E.coli W3110中可以实现hu1FNa-2b较高水平的分泌表达,经过低磷诱导其表达量最高可至20μg/ml(A550)菌液,约有30%的目标蛋白质信号肽能够被成功切除并分泌到胞间质中。Western blot表明目标蛋白具有与hu1FN-α2b标准品相同的免疫原性；离心收集菌体,加入一定量的PBS(pH 8.0)反复冻融后取上清液,VVISH-VSV系统证实其总活性达1.425×105IU/ml,相对的包涵体表达体系作为对照其总活性为1.259×103IU/ml。结论：成功构建5’端突变的hu1FN-a2b原核分泌型表达工程菌pPSIFN-4L_E.coliW3110,其表达量以及分泌效率均达到较高水平。