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目的:研究太白楤木总皂苷(Total saponin of Aralia Taibaiensis,TSAT)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用及促凋亡作用,并探讨NF-κB信号通路在TSAT诱导HSC-T6凋亡中的作用,初步探究其作用机制。 方法:(1)体外培养HSC-T6细胞,采用MTT法检测TSAT各剂量组对HSC-T6细胞增殖的作用,筛选TSAT最佳作用浓度及给药时间;(2)倒置显微镜、HE染色观察细胞形态学变化;(3)ELISA法检测HSC-T6细胞培养上清液中透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅰ型胶原蛋白(COLI)、Ⅲ型胶原蛋白(COLIII)含量的变化,探讨TSAT对HSC-T6细胞功能的影响;(4)Hoechst33342染色法观察细胞核形态改变,流式细胞术检测细胞凋亡率,研究TSAT诱导HSC-T6细胞凋亡的作用;(5)免疫细胞化学(SABC)法检测凋亡相关基因蛋白NF-kB p56、IKK-α、IKB-α在HSC-T6细胞中的表达,探究NF-κB信号通路在TSAT诱导HSC-T6细胞凋亡中的作用。 结果:(1)TSAT对HSC-T6细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时间-剂量依赖性,药物浓度为40,50,60μg/mL、作用24h时对HSC-T6细胞增殖抑制作用显著;(2)倒置显微镜下可见,空白对照组细胞贴壁均匀,呈梭形或不规则形,胞质均匀透明;TSAT各给药组随给药剂量的增加细胞数量逐渐减少,部分细胞皱缩,突起减少,贴壁不牢固。HE染色可见,空白对照组细胞呈圆形、菱形或不规则形,有胞突相连形成星状,染色质分布均匀,细胞排列紧密,胞质中央有椭圆形细胞核,呈成纤维细胞样表型;TSAT给药组细胞变小变圆,胞突消失,染色质分布不均;(3)TSAT各浓度处理24小时后,上清液中HA、LN、COLI、COLIII含量均降低,与空白对照组比较差异显著(P<0.01);(4)荧光显微镜下,空白对照组细胞核呈均匀的淡蓝色荧光,轮廓清晰,形态规则;TSAT各浓度组处理24h后,40μg/ml组细胞核变形,部分染色质出现浓缩状态,50μg/ml、60μg/ml给药组可见部分细胞胞核裂解,呈碎片状,花环状凋亡小体形成;(5)Annexin V-/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率结果显示,随着给药浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加,且主要以细胞早期凋亡为主;(5)免疫细胞化学结果显示:随TSAT给药浓度增加,HSC-T6细胞内NF-κB p65、IKK-α蛋白表达减少,IκB-α蛋白的表达增多,提示TSAT可能通过抑制NF-κB通路活化而发挥促进HSC-T6细胞凋亡作用。 结论:(1)TSAT对HSC-T6细胞具有明显的增殖抑制作用;(2)TSAT能够抑制HSC-T6细胞合成分泌胶原,抑制其活性;(3)TSAT能够诱导HSC-T6细胞凋亡,表现为促进细胞早期凋亡;(3)TSAT能够通过减少HSC-T6细胞内NF-κB p65、IKK-α蛋白表达,增加IκB-α蛋白的表达,调控HSC-T6细胞NF-κB通路诱导活化的HSC-T6细胞凋亡,发挥抗肝纤维化作用。