玉米及大麦中真菌毒素检测的荧光适配体传感器研究

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谷物在生长、贮存、运输等环节容易遭到真菌侵染引起腐烂变质,其在适宜环境下会产生具有致癌、致畸、致突变性的强毒性次生代谢产物-真菌毒素。目前,在诸多检测真菌毒素的方法中,色谱-质谱联用法和免疫分析法等准确性好、可靠性高,但同时存在仪器昂贵、专业技术要求高等不足。因此,构建和完善新型检测方法实现真菌毒素的简便、灵敏、准确分析十分重要。本论文从研究玉米及大麦中真菌毒素的高特异性、高灵敏度分析的角度出发,结合荧光适配体传感技术,以新型碳基量子点为荧光探针,构建新型传感平台用于检测两种真菌毒素,即赭曲霉毒素A(OTA)和玉米赤霉烯酮(ZEN)。主要工作内容包括以下两个部分:(1)利用羟基氧化钴(CoOOH)纳米片作为氮化碳量子点(g-CNQDs)的猝灭剂,结合不同构型适配体与CoOOH纳米片之间范德华力的强弱差异,构建了可简便、灵敏检测玉米及大麦中OTA的“Turn-on”型荧光适配体传感器。研究表明,由于g-CNQDs与CoOOH纳米片之间存在荧光共振能量转移(FRET),g-CNQDs的荧光猝灭率高达90%。当OTA存在时,线状适配体与OTA特异性结合形成G-四链体,其与CoOOH纳米片的吸附能力较弱,使FRET作用受阻,g-CNQDs的荧光随之恢复。由此,可根据OTA浓度依赖性的荧光强度恢复,实现OTA的定量检测。该“Turn-on”型传感器对OTA的线性响应范围为1.00 nmol L-1140 nmol L-1,检测限为0.50 nmol L-1。该传感器已成功应用于玉米粉与大麦粉中OTA的检测,所得回收率在94.5%101%之间。(2)为了解决单一检测信号易受环境、探针浓度等外部因素干扰的问题,进一步提高传感方法的准确性及灵敏度,分别以氮杂石墨烯量子点(NGQDs)和二氧化硅包裹的碲化镉量子点(CdTe@SiO2)作为参考探针和响应探针,利用米托蒽醌(MTX)对CdTe@SiO2的猝灭作用,构建了可灵敏、准确、特异性检测玉米及大麦中ZEN的比率荧光适配体传感器。研究表明,由于MTX与CdTe@SiO2之间的光谱重叠,MTX可以通过内滤效应猝灭CdTe@SiO2的荧光信号且对NGQDs的荧光强度无影响。该比率荧光适配体传感器对ZEN的线性响应范围为1.00 pmol L-11.00 nmol L-1,检测限为0.33 pmol L-1。该传感器已成功应用于玉米粉与大麦粉中ZEN的检测,加标回收率在97.8%110%之间,其检测结果与高效液相色谱-荧光法(HPLC-FL,国标方法)结果基本一致,表明制备的传感器具有较好的准确性。
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