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背景:在全球,每年约有22%的死亡病例是由于各类型的癌症所引起。肿瘤的发病原因是非常复杂的,涉及多种原因[1-6]。胃癌是世界范围内最为常见的恶性肿瘤之一,尽管近年来胃癌的发病率和致死率已经有一定程度的下降,但是胃癌的5年生存率仍然保持在较低水平。Rab18是Ras致癌基因家族中的重要一员,最新研究证实了 Rabl8参与了肿瘤的形成过程。Rabl8的过表达可促进多种肿瘤细胞侵袭,同时抑制肿瘤细胞凋亡,包括甲状腺髓样癌和非小细胞癌。但是Rabl8在胃癌中的表达模式以及生物学作用还是未知的。 目的:在本次研究中,我们将分析Rabl8在胃癌组织和细胞中的表达模式以及生物学功能,分析是否可作为诊断和治疗胃癌的分子标记物。此外,还通过一系列细胞实验分析其对胃癌细胞生物学功能的影响以及潜在的分子生物学机制。 方法:我们通过免疫组织化学方法检测胃癌组织样本以及相应癌旁健康组织中Rabl8的蛋白表达水平。正常胃黏膜上皮细胞GES-1及胃癌细胞系细胞系购买于ATCC和中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。RAB18质粒购自Origene公司,并用Lipo3000转染试剂进行转染。RAB18干扰序列以及NegtivesiRNA购自Dharmacon公司,所用干扰试剂为Dharmafectl。通过Western blot方法分析转染以及干扰Rabl8后,胃癌细胞中 p-DRPl,DRP1, Mfiil, Fisl,survivin, p-STAT3, STAT3, p-Rb, E-cadherin蛋白表达水平的变化。MTT实验以及集落形成实验用来分析Rabl8对胃癌细胞增殖能力的影响。Rabl8表达水平的差异对胃癌细胞转移与侵袭能力的影响通过基质胶侵袭实验来分析。将经过Rabl8转染以及干扰的胃癌细胞用顺铂进行处理,并通过流式细胞术分析细胞的凋亡水平变化。统计分析使用SPSS13.0软件。 结果:Rabl8在肿瘤组织和细胞中阳性表达。Rabl8过表达与肿瘤较高的TNM分期,淋巴结转移以及肿瘤的复发显著相关。Rabl8过表达促进胃癌细胞增殖,侵袭,转移,周期转化以及化疗抵抗性。Rabl8过表达后,线粒体分裂增加,线粒体膜电位升高,产生的活性氧类自由基减少。在胃癌细胞中转染Rabl8质粒后,p-STAT3, p-Rb,survivin, p-DRPl, Fisl的表达量上调,E-cadherin,Mfnl的表达量下调。胃癌细胞中转染Rabl8质粒后,p-STAT3以及survivin表达量增加。胃癌细胞中转染Rabl8质粒并用STAT3通路抑制剂处理后,Rabl8对细胞中survivin表达水平的调控作用被消除。 结论:Rabl8在胃癌中表达量上调,其高表达水平与肿瘤较髙的TNM分期,淋巴结转移以及肿瘤复发显著相关。Rabl8过表达可促进胃癌细胞的增殖,侵袭,转移,增加胃癌细胞对化疗药物的抵抗性。Rabl8过表达限制了细胞中线粒体功能的正常发挥。Rabl8激活胃癌细胞中的STAT3/survivin信号通路,并调控p-DRPl,Mfnl, Fisl, p-Rb, E-cadherin的表达量。