论文部分内容阅读
感染性炎症是由于机体组织损伤,致病菌入侵致使机体在局部或全身范围表现出的综合性非特异防御应答。感染性炎症的持续发展可使得机体免疫系统失控,使其病原菌在体内迅速繁殖并产生大量毒素,诱发免疫系统进入无能状态并加重组织器官的损伤,由此而产生败血症。败血症的致死率较高,在西方发达国家,大约每年有一百五十万人患病,死亡率达30%-50%。补体(complement,C)是由30余种广泛存在于血清、组织液和细胞膜表面的蛋白质组成的,具有精密调控机制的蛋白质反应系统,其活化过程表现为一系列丝氨酸蛋白酶的级联酶解反应。补体系统参与机体的特异性和非特异性免疫机制,表现为抗微生物防御反应,免疫调节及介导免疫病理的损伤性反应,是机体应答入侵微生物和感染介质的第一道防线。在补体激活产物中C5a是一种具有广泛生物活性的趋化因子,如参与趋化中性粒细胞;介导吞噬性细胞颗粒酶的释放;调节细胞因子的分泌如IL-6;扩张血管等。而过度活化的补体C5a能够导致炎症反应的过度放大,导致天然免疫系统的失调,例如中性粒细胞的无功能;血小板激活;直接或间接的微血管损伤。研究证明在实验性败血症中阻断C5a或者是C5a受体(C5aR/CD88)对生存率的改善是有积极意义的。IL-8是一种具有很强趋化活性的细胞因子,能够促进中性粒细胞的活化和脱颗粒。由于对中性粒细胞很强的趋化活性,IL-8被认为在败血症的致病过程中发挥了重要作用。Hack等证明在败血症病人的血清中IL-8有明显的升高。IL-8由许多细胞产生,包括血液中的单核细胞,巨噬细胞和内皮细胞。在疾病的进展过程中IL-8可能通过趋化过量的中性粒细胞达到炎症部位而引起组织损伤。在动物的败血症模型上阻断小鼠IL-8(也称为KC,角质化细胞来源的细胞因子)之后可以显著提高早期的生存率。基于IL-8在感染性炎性疾病中的重要作用,深入探讨其表达调节机制对于及时防治感染性疾病的进展有着重要意义。感染性炎症过程中补体C5a发挥病理效应的机制之一是诱导其它炎症介质的大量释放。研究数据显示补体C5a在炎症细胞因子IL-6、IL-17、TNFα的调节中发挥了重要作用。过度活化的C5a在感染性炎症中对IL-8释放的调节作用和及调节途径、方式是本研究课题所关注的内容。为了回答上述问题,本研究用模拟感染的体外实验和败血症小鼠模型的体内实验探讨了在感染性炎症中补体C5a对IL-8的调节作用和方式,为深入认识感染性炎症下C5a的作用机理,及其与IL-8表达调节的关系提供了新的实验依据。本研究共分为四个部分:(1)外源性C5a协同LPS刺激IL-8产生的效应及机制研究(2)外源性C5a协同TLR激动剂诱导IL-8产生的效应研究(3)体外感染模型中内源性人C5a促进IL-8产生的效应及机制(4)败血症模型中过度活化的C5a对小鼠IL-8表达的调节效应在体外实验中我们发现C5a能够协同增强LPS和其它的Toll样受体激动剂刺激全血产生IL-8,MAPKs途径中的ERK和p38被证明在这个过程中发挥了重要作用。大肠杆菌K12体外刺激人全血后C5a和IL-8的含量明显升高,而且在C5a被单抗阻断之后IL-8的水平明显下调。体内实验中,我们采用了经典的败血症动物模型CLP(盲肠结扎穿孔)。在CLP手术组我们发现小鼠IL-8 (KC)在mRNA水平上明显上调,在用抗体中和C5a之后KC表达水平明显下降。以上研究结果提示作为炎性因子的IL-8在感染性炎症的免疫应答网络中可能仅作为炎性效应分子,它的上调效应受过度活化的C5a调控。这将为深入认识C5a过度活化对免疫应答网络中不同炎性因子的调节作用提供重要的依据,并为感染性炎症疾病如败血症的治疗提供新的思路。