RNAi沉默MACC1基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移的实验研究

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qianwenlong
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:化学合成针对结肠癌转移相关基因1(metastasisassociated in colon cancer1, MACC1)的小干扰RNA (smallinterfering RNA,siRNA),将其转染人乳腺癌细胞株MCF-7,观察MACC1表达受抑制后,结肠癌转移相关基因1(MACC1)对MCF-7细胞的增殖、迁移以及迁移相关蛋白S100A4和vimentin的影响。方法:(1)将MACC1基因设计3个干扰序列和1个阴性对照序列。(2)将3对MACC1-siRNA和1对阴性对照siRNA(negative controlsiRNA,NC-siRNA)转染体外培养的MCF-7细胞,转染48h后采用RT-PCR检测MACC1mRNA的表达,将干扰效率最高的MACC1-siRNA用于后续实验。(3)实验分为3个组别:CON组(MCF-7空白对照组),NC组(MCF-7转染阴性对照的siRNA)和siRNA组(MCF-7转染目的siRNA)。(4)采用MTT法观察3组细胞的增殖状态。(5)Transwell迁移实验检测3组细胞的迁移能力。(6)Western blot检测迁移相关蛋白S100A4和vimentin的表达。结果:(1)MACC1基因在乳腺癌MCF-7细胞高表达。(2)倒置荧光显微镜显示各转染组细胞发出绿色荧光,当siRNA转染试剂(ul):siRNA(ug)为5:1时,MCF-7细胞转染的效率最高,达85%以上。RT-PCR电泳结果显示:MACC1-siRNA1-3组MACC1mRNA较正常对照组,表达水平分别下降了80.6%、31.8%、27.2%,提示MACC1-siRNA1的干扰效率最高。(3)针对MACC1基因的siRNA转染MCF-7细胞48h后,siRNA组与空白对照组比,能够显著抑制MACC1蛋白合成,抑制效率为75%。(4)MACC1特异性siRNA转染MCF-7细胞24、48、72h后,MTT结果显示与空白对照组比较,siRNA组能够抑制细胞生长,并随着时间延长效果显著(P<0.05),将阴性对照组和空白对照组比,两组的差别无统计学意义(P>0.05)。(5)转染MCF-7细胞48h后,Transwell迁移实验结果显示siRNA组与空白对照组比较,穿过小室细胞数明显降低,其能有效抑制MCF-7细胞迁移(P<0.05),将空白对照组和阴性对照组比,差异无统计学意义(P>0.05)。(6)siRNA组与空白对照组相比,迁移相关蛋白S100A4和vimentin表达降低(P<0.05),将空白对照组和阴性对照组比较,两组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论(1)针对MACC1基因特异性siRNA抑制靶基因表达效果显著;(2)干扰MACC1基因表达后,MCF-7细胞的增殖受到明显抑制,并且其迁移能力也明显降低;(3)MACC1基因特异性siRNA能够抑制Wnt/β-catenin信号通路中关键的转录因子S100A4,并降低MCF-7细胞中间质标志物vimentin的表达。
其他文献
目前对云计算的研究,大多都是从云计算构架与实现的角度来研究云计算平台的构建应用,以充分发挥云计算的独特优势。本文主要是从信息资源共享角度,讨论云计算环境下信息资源共享
这几年,随着科学技术的持续进步,越来越多的工业企业对新型金属材料的需求量不断增加。新型金属材料是许多行业中必不可少的工程组成材料。新型金属材料是合金的一部分,与普
集装箱养殖模式可替代自然水域的传统高污染养殖模式,占地面积小,耗能低,有助于突破土地、环保和人力等资源要素瓶颈;提质增效大,单位产出高,有助于提高水产养殖业经济效益;
在软件开发和后续使用中,一旦数据库泄漏,会直接影响公司的软件服务质量和用户的使用体验,并且有可能使软件开发者蒙受上百万的经济损失,因此加强数据库安全设计始终是软件开
锑是我国锑资源优势,但自民企开采以来锑锑产量高过消耗需求,为实现销售谋利,民企一直以初级产品的形式出口,致使锑品走私严重,一直制约着国有锑企业的发展;控制初级锑品的出
近日,由中国电信宣城分公司建设的全国首例特高压变电站与5G通信技术结合的泛在电力物联网建设工程在古泉换流站通过验收。测试显示,以基站为中心的十几个典型位置无线传输通
研究背景与目的:直到现在肺癌的5年生存率都处于很低的水平,且是全世界恶性肿瘤主要的死亡原因之一,目前肺癌的死亡率通过手术、放疗、化疗以及综合治疗等治疗方式还是不能得到
泥石流的发生受控于多种因子,而各因子属性段对泥石流的发生起到不同的作用。以甘肃南部武都地区为研究区,考虑到地震扰动影响并结合当地的地质环境条件,选取了高程、坡度、
目的研究延续性护理干预对出院喉癌患者生活质量的影响。方法选取2016年8月—2017年8月我院收治的喉癌患者80例作为研究对象。采用数字随机表法,将其分为实验组和参照组,每组
针对餐饮企业人工点菜效率低的问题,以STC12LE5A60S2单片机为微控制器,使用基于RFID的NRF905无线模块,结合TFT触摸屏,设计了一种针对餐饮运营效率提高的无线点菜系统,手持点