5-Fu作用于瘢痕疙瘩成纤维细胞后Caspase-3变化的研究

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目的:从蛋白层面证明瘢痕疙瘩、正常皮肤成纤维细胞中Caspase-3蛋白表达水平存在差异。通过5-fu(5-氟尿嘧啶)浓度梯度作用瘢痕疙瘩成纤维细胞后,观察细胞中Caspase-3蛋白的表达,及细胞增殖、迁移和侵袭性变化。方法:临床手术获取瘢痕疙瘩、正常皮肤组织块,培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast KF)及正常皮肤成纤维细胞(normal skin fibroblast NSF),应用免疫组织化学及Western blot检测组织块及细胞中Caspase-3蛋白的表达;将5-fu(5-氟尿嘧啶)浓度梯度作用瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)后,应用Western blot检测Caspase-3蛋白的表达;CCK-8法检测KF细胞增殖情况;用Transwell进行KF细胞的体外迁移以及侵袭能力的检测。结果:瘢痕疙瘩组织、正常皮肤组织、KF、NSF中均有Caspase-3蛋白的表达;KF中Caspase-3蛋白表达水平明显低于NSF,差异有统计学意义(P<0.05),瘢痕疙瘩组织块与正常皮肤组织相比Caspase-3蛋白表达水平明显降低,差异存在统计学意义(P<0.05);5-fu浓度梯度(0.1mmol/L,0.01mmol/L,0.001mmol/L)作用KF后,Western Blot显示随着5-fu浓度的降低,KF中Caspase-3蛋白表达减少,与无5-fu作用的对照组比较,差异存在统计学意义(P<0.05)。CCK-8结果显示,随着5-fu浓度的降低,对KF增值活性的抑制不断减弱,与无5-fu作用的对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell实验结果显示迁移到下室的KF数目随5-fu浓度的不断降低,而增多,与无5-fu作用的对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Caspase-3在KF中的表达明显低于NS,同时是5-fu诱导KF凋亡的关键因子,5-fu在一定浓度范围内可以激活Caspase-3得表达,同时抑制KF增殖、侵袭、迁移等肿瘤特性。
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