论文部分内容阅读
目的:探讨非小细胞肺癌(Non-small cel lung cancer,NSCLC)原发灶、淋巴结癌转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原的表达及其相关性,并对抗原加工机器组分TAP1、LMP2 mRNA缺陷及原癌基因K-ras点突变、C-erbB-2扩增对NSCLC经典HLA-Ⅰ类抗原表达的调控作用进行初步探索。方法:(1)应用流式细胞术检测65例NSCLC原发灶及31例淋巴结转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原的表达(正常肺组织及淋巴结组织作对照)。(2)应用RT-PCR技术检测31例非小细胞肺癌原发灶、31例淋巴结转移灶(根据流式细胞术检测其经典HLA-Ⅰ类抗原呈阴性表达或低表达)TAP1mRNA、LMP2 mRNA的表达(经典HLA-Ⅰ类抗原呈阳性表达的肺癌原发灶及正常肺组织、淋巴结组织作对照)。(3)应用差别PCR技术、PCR-RFLP技术检测65例肺癌原发灶、31例淋巴结转移灶(根据流式细胞术检测其经典HLA-Ⅰ类抗原呈阴性表达或低表达)C-erbB-2扩增及K-ras基因第12位密码子点突变(正常肺组织及淋巴结组织作对照)。并根据不同的变量类型及目的,分别采用t检验,Spearman相关分析,卡方检验,Logistic回归分析及Fisher’s精确概率法进行统计学分析。结果:(1)65例肺癌原发灶中有58例(89.2%)表现为经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调(阴性表达和低表达)。存在淋巴结转移的肺癌原发灶其经典HLA-Ⅰ类抗原的平均表达率(31.89±9.56%)低于无淋巴结转移肺癌原发灶的经典HLA-Ⅰ类抗原的平均表达率(42.46±10.380%),但差异无统计学意义(t=1.57,P>0.05)。淋巴结转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原的表达率(15.35±6.240%)明显低于肺癌原发灶(39.68±12.460%)(t=2.06,P<0.05),且与肺癌原发灶经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调明显呈正相关(r_s=0.487,P<0.01)。(2)经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调(阴性表达和低表达)的肺癌原发灶中,TAP1 mRNA表达率为41.9%(13/31),经典HLA-Ⅰ类抗原阳性表达的肺癌原发灶TAP1 mRNA表达率为88.9%(8/9),二者相比,有统计学差别(P=0.014)。经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调的肺癌原发灶LMP2 mRNA表达率为38.7%(12/31),经典HLA-Ⅰ类抗原阳性表达的肺癌原发灶LMP2 mRNA表达率为77.8%(7/9),二者相比,有统计学差别(P=0.039)。经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调的淋巴结癌转移灶中TAP1 mRNA表达率为16.1%(5/31),明显低于肺癌原发灶(x~2=5.01,P<0.05);LMP2 mRNA表达率为12.9%(4/31),也同样低于肺癌原发灶(x~2=5.39,P<0.05)。(3)肺癌原发灶K-ras基因突变率为23.1%(15/65),在经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调的肺癌原发灶中表达,在经典HLA-Ⅰ类抗原表达呈阳性的肺癌原发灶中不表达,其在经典HLA-Ⅰ类抗原呈阴性表达的肺癌原发灶中的表达率为54.5%(6/11),在呈低表达的肺癌原发灶中的表达率为20%(9/45),存在明显差异(x~2=5.38,P<0.05)。在31例淋巴结转移灶中,K-ras基因突变率为41.9%(13/31),比肺癌原发灶高,但差别无统计学意义(x~2=3.56,P>0.05)。(4)肺癌原发灶C-erbB-2扩增率为32.3%(21/65),在经典HLA-Ⅰ类抗原阴性表达、低表达、阳性表达的肺癌原发灶中均有表达,其中在经典HLA-Ⅰ类抗原阴性表达与阳性表达的肺癌原发灶中,C-erbB-2扩增率存在差异(p=0.02)。淋巴结转移灶中亦表现出C-erbB-2扩增,扩增率为48.4%(15/31),高于肺癌原发灶,但统计学分析无差别(x~2=2.32,P>0.05)。经典HLA-Ⅰ类抗原阴性表达与低表达淋巴结癌转移组,C-erbB-2扩增率比较无统计学差异(P=0.18)。结论:(1)流式细胞术可有效检测NSCLC癌组织经典HLA-Ⅰ类抗原的表达;存在淋巴结转移的肺癌原发灶与无淋巴结转移的肺癌原发灶相比,其经典HLA-Ⅰ类抗原表达无差异;淋巴结转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原的表达率明显低于肺癌原发灶,二者明显呈正相关,表明原发灶中存在经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调的肿瘤细胞更具转移潜能,经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调是肺癌淋巴结转移的机制之一。(2)TAP1、LMP2 mRNA的表达缺陷是NSCLC原发灶及淋巴结转移灶经典HLA-Ⅰ抗原表达下调的机制之一,在淋巴结癌转移灶表现更明显。(3)癌基因K-ras突变和C-erbB-2扩增与NSCLC原发灶及淋巴结转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原表达呈负相关。第一部分流式细胞术检测非小细胞肺癌经典HLA-Ⅰ类抗原的表达目的:探讨非小细胞肺癌原发灶、淋巴结癌转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原的表达及其相关性,并探讨经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调与淋巴结癌转移的关系。方法:应用流式细胞术检测65例NSCLC原发灶及31例淋巴结转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原的表达(正常肺组织及淋巴结组织作对照),t检验比较二者经典HLA-Ⅰ类抗原表达的差别,Spearman相关分析比较二者经典HLA-Ⅰ类抗原表达的相关性,Logistic多因素回归分析判定经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调与肺癌淋巴结转移的关系。结果:65例肺癌原发灶中有58例(89.2%)表现为经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调。存在淋巴结转移的肺癌原发灶经典HLA-Ⅰ类抗原的平均表达率(31.89±9.56%)低于无淋巴结转移的肺癌原发灶(42.46±10.38%),但差异无统计学意义(t=1.57,P>0.05)。淋巴结癌转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原的表达率(15.35±6.24%)明显低于肺癌原发灶(39.68±12.46%)(t=2.06,P<0.05),且与肺癌原发灶经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调明显呈正相关(r_s=0.487,P<0.01)。Logistic回归分析显示,经典HLA-Ⅰ类抗原阴性表达(OR=2.570,P=0.036)是肺癌淋巴结转移的危险因素。结论:流式细胞术可有效检测NSCLC癌组织经典HLA-Ⅰ类抗原的表达;淋巴结癌转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原的表达率明显低于肺癌原发灶的表达,二者明显呈正相关,表明原发灶中存在经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调的肿瘤细胞更具转移潜能,经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调是肺癌淋巴结转移的机制之一。第二部分非小细胞肺癌TAP1、LMP2 mRNA缺失与经典HLA-Ⅰ抗原表达下调的关系目的:探讨抗原加工机器组分TAP1、LMP2 mRNA缺陷与NSCLC原发灶、淋巴结癌转移灶经典HLA-Ⅰ抗原表达下调(阴性表达或低表达)的关系,并探讨TAP1、LMP2 mRNA缺失与NSCLC淋巴结转移的相关性。方法:应用RT-PCR技术检测31例非小细胞肺癌原发灶、31例淋巴结转移灶(根据流式细胞术检测其经典HLA-Ⅰ类抗原呈阴性表达或低表达)TAP1、LMP2 mRNA的表达(经典HLA-Ⅰ类抗原呈阳性表达的肺癌组织及正常肺组织、淋巴结组织作对照),卡方检验或Fisher’s精确概率法比较其差异性,Logistic回归分析判断TAP1、LMP2 mRNA缺失与NSCLC淋巴结癌转移的相关性。结果:经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调的肺癌原发灶中,TAP1 mRNA表达率为41.9%(13/31),经典HLA-Ⅰ类抗原阳性表达的肺癌原发灶TAP1 mRNA表达率为88.9%(8/9),二者相比,有统计学差别(P=0.014:)。经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调的肺癌原发灶LMP2 mRNA表达率为38.7%(12/31),经典HLA-Ⅰ类抗原阳性表达的肺癌原发灶LMP2 mRNA表达率为77.8%(7/9),二者相比,有统计学差别(P=0.039)。经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调的淋巴结癌转移灶中TAP1 mRNA表达率为16.1%(5/31),明显低于经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调的肺癌原发灶(x~2=5.01,P<0.05);LMP2 mRNA表达率为12.9%(4/31),也同样低于肺癌原发灶(x~2=5.39,P<0.05)。Logistic回归分析显示,TAP1+LMP2阴性表达(OR=6.834,P=0.008)、TAP1阴性表达(OR=3.258,P=0.038)、LMP2阴性表达(OR=2.853,P=0.023)是肺癌淋巴结转移的危险因素。结论:TAP1、LMP2 mRNA的表达缺陷是NSCLC原发灶及淋巴结癌转移灶经典HLA-Ⅰ抗原表达下调的机制之一,在淋巴结癌转移灶表现更明显。TAP1、LMP2 mRNA表达缺陷是NSCLC淋巴结癌转移的危险因素。第三部分癌基因K-ras和C-erbB-2与非小细胞肺癌经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调的关系目的:探讨癌基因K-ras突变和C-erbB-2扩增与非小细胞肺癌原发灶及淋巴结癌转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调的关系。方法:分别应用差别PCR技术、PCR-RFLP技术检测65例肺癌组织、31例淋巴结转移灶(根据流式细胞术检测其经典HLA-Ⅰ类抗原呈阴性表达或低表达)C-erbB-2扩增及K-ras基因第12位密码子点突变(正常肺组织及淋巴结组织作对照),应用卡方及Fisher’s精确概率法进行统计学分析。结果:(1)肺癌原发灶K-ras基因突变率为23.1%(15/65),在经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调的肺癌原发灶中表达,在经典HLA-Ⅰ类抗原表达呈阳性的肺癌原发灶中不表达,其在呈阴性表达的肺癌原发灶中的表达率为54.5%(6/11),在呈低表达的肺癌原发灶中的表达率为20%(9/45),存在明显差异(x~2=5.38,P<0.05)。在31例淋巴结转移灶中,K-ras基因突变率为41.9%(13/31),比肺癌原发灶高,但差别无统计学意义(x~2=3.56,P>0.05)。淋巴结转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原阴性表达组,K-ras基因突变率为50%(11/22),高于低表达组22.2%(2/9),但统计学差别不明显(P=0.12)。(2)肺癌原发灶C-erbB-2扩增率为32.3%(21/65),在经典HLA-Ⅰ类抗原阴性表达、低表达、阳性表达的肺癌原发灶中均有表达,其中在经典HLA-Ⅰ类抗原阴性表达与阳性表达的肺癌原发灶中,C-erbB-2扩增率存在差异(p=0.02)。淋巴结转移灶中亦表现出C-erbB-2扩增,扩增率为48.4%(15/31),高于肺癌原发灶,但统计学分析无差别(x~2=2.32,P>0.05)。经典HLA-Ⅰ类抗原阴性表达与低表达淋巴结癌转移组,C-erbB-2扩增率比较无统计学差异(P=0.18)。(3)K-ras基因突变和C-erbB-2扩增共表达在65例肺癌原发灶中共检测到12例,占18.5%(12/65),在经典HLA-Ⅰ类抗原阴性表达组共表达率为45.5%(5/11),高于经典HLA-Ⅰ类抗原低表达组的15.6%(7/45),有统计学差异(x~2=4.69,P<0.05)。淋巴结转移灶中二者共表达占29%(9/31),高于肺癌原发灶,但统计分析无明显差别(x~2=1.37,P>0.05)。二者共表达在淋巴结转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原阴性表达组与低表达组分别为36.4%(8/22)、11%(1/9),经典HLA-Ⅰ类抗原阴性表达组高于低表达组,但无统计学差异(P=0.14)。结论:癌基因K-ras突变和C-erbB-2扩增与NSCLC原发灶及淋巴结转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原表达呈负相关。