产吲哚-3-乙酸菌株的筛选、鉴定及其对盐碱地改良作用研究

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盐碱地土壤是由碳酸盐、磷酸盐过度累积造成的,在盐碱地中,土壤的碱化度、盐分会急剧升高,作物生长受限。此前,一般通过磷酸钙、尿素、碳酸钙等化学肥料来对盐碱地进行修复,但化学肥料的施用,盐碱地的有益菌会大量减少,导致盐碱地遭到进一步恶化。近年来,生物菌肥因其兼具高效与环保的特点受到行业聚焦,我国生物菌肥施用增长迅速,但与化学肥料相比仍存在一定差距,因此开发新的生物菌肥具有广阔前景。本文主要从盐碱地土壤筛选产吲哚-3-乙酸(Indole-3-acetic acid,IAA)菌株,优化菌株产吲哚-3-乙酸的能力,测定菌株降低p H、产铁载体、溶无机磷、解有机磷、产滤纸酶、羧甲基纤维素酶活相关促生功能,将菌株与各种基质以最优配比发酵为生物菌肥,最后应用于盆栽大葱和大田铁杆葱,研究生物菌肥对铁杆葱和盐碱地的影响。研究结果如下:(1)通过LB培养基初筛和Salkowski显色液复筛,筛选得到一株产吲哚-3-乙酸22.92μg/m L的菌株,短小杆菌A8(Exiguobacterium sp.A8),在最适p H8、最适温度35℃、最适盐度1%、最适碳源麦芽糖、最适氮源牛肉膏、最适碳氮比1∶2时,菌株产吲哚-3-乙酸能力为68.84μg/m L。(2)验证了A8菌株能在24 h时将p H为10的LB液体培养基降低至p H8.3,产生铁载体功能测定的HC值(透明圈直径与菌落直径的比值)为1.62,解有机磷和溶无机磷功能测定的HC值分别为1.84和1.36,羧甲基纤维素酶活力和滤纸酶活力分别为1.77 U/m L和2.99 U/m L。(3)在盆栽实验中,得出了生物菌肥各个成分(牛粪∶麦麸皮∶秸秆粉∶细菌菌液∶水)的最适配比为17∶76∶50∶3∶88,在最适配比下,大葱的发芽率为71.25%,最适配比的生物菌肥处理80天后,大葱株高、茎粗、茎长、根长分别为58.13 cm、1.05 cm、13.63 cm、11.3 cm。(4)在大田实验中,共有三个组(空白组CK1-不加肥料;对照组CG1-牛粪8.5kg、麦麸皮38 kg、秸秆粉25 kg、水44 kg;实验组EG1-牛粪8.5 kg、麦麸皮38 kg、秸秆粉25 kg、水44 kg、菌液1.5 kg),结果表明,加了实验组EG1的生物菌肥100天后,大葱的株高、茎粗、茎长、根长较移栽时的增长率分别为281.59%、691.43%、508.67%、319.6%,比空白组CK1较移栽时的增长率高29.44%、241.43%、122.2%、50.57%,比对照组CG1较移栽时的增长率高29.54%、146.99%、89.13%、21.6%,和空白组CK1、对照组CG1相比,实验组EG1具有显著提高株高、茎粗、茎长、根长能力。对于土壤养分和土壤p H,加了实验组EG1的生物菌肥后,碱解氮、全磷、全钾、有效磷、有效钾的含量显著提高,土壤的p H从8.43下降为7.38。(5)将铁杆葱根际土进行宏基因组分析发现,实验组EG1的Chao 1指数、Faith_pd指数、Observed_species指数相对于对照组CG1、空白组CK1显著升高,实验组EG1的Simpson指数相对于对照组CG1、空白组CK1显著下降,实验组EG1土壤中的物种丰富度更大,物种多样性更加丰富,实验组EG1土壤的菌群结构受到了生物菌肥干预的影响,而且实验组EG1的优势菌属为芽孢杆菌属(Bacillus)、糖多孢菌属(Saccharopolyspora)、分枝杆菌属(Mycobacterium),与对照组CG1、空白组CK1优势菌属不同,采用PICRUSt2分析功能预测,发现实验组EG1的生物菌肥主要有氨基酸代谢、碳水化合物代谢、脂质代谢等功能,因此,实验组EG1的生物菌肥在盐碱地治理方向具有极大的应用前景。
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