亲环素A（Cyclophilin A,Cyp A）是一种广泛表达的细胞蛋白,参与感染、炎症等多种病理反应。Cyp A在多种病毒的复制过程中都发挥重要的作用。然而,目前在神经坏死病毒复制中Cyp A发挥的作用知之甚少。NNV最先是从患病的海洋鱼类中分离出来的,目前已在120多种养殖和野生鱼类中都有报道,并给水产养殖业造成了巨大的经济损失。最近还报道发现在实验条件下,一些淡水养殖鱼类也对NNV敏感。因此,对病毒的预防以及治疗需进一步研究。本研究开展了亲环蛋白A在赤点石斑鱼神经坏死病毒（RGNNV）感染中的功能研究,主要结果如下:1、斜带石斑鱼（Epinephelus Coioides）亲环蛋白A的克隆和分析。从斜带石斑鱼的鳍条细胞系（GF-1）中克隆得到石斑鱼的Cyp A基因（GF-Cyp A）。通过序列分析得到,GF-Cyp A基因全长为743 bp,开放阅读框（ORF）全长495 bp,编码164个氨基酸,分子量为17.4 k Da。通过生物信息学分析,并使用软件phyre2预测二级结构和三维结构,发现GF-Cyp A存在β折叠、螺旋以及回文结构,还预测了结合位点、溶剂的连接性以及环路、螺旋和链的百分比。同时,利用多种生物信息学相关软件进行了系统发育分析、多序列比对和同源性分析,推导出Cyp A的氨基酸序列与其他动物的Cyp A具有高度保守的PPIase结构域,说明GF-Cyp A是亲环素A家族的新成员。2、GF-Cyp A对RGNNV的增殖的抑制作用。为了研究GF-Cyp A在RGNNV感染过程中的作用,进行了一系列实验来应对这一挑战。我们观察到GF-Cyp A在感染RGNNV的GF-1细胞中上调。此外,Cyp A的过度表达可显著抑制RGNNV在GF-1细胞中的复制,同时也抑制转录和翻译水平。同样,在病毒滴定测定中也观察到RGNNV产生被抑制。相比之下,当GF-Cyp A在GF-1细胞中被si RNA干扰时,RGNNV的复制得到了增强。在转染GF-Cyp A后感染RGNNV发现,TNF-2、TNF-α、IL-1b、ISG-15等促炎症因子的显著性表达,暗示着GF-Cyp A可能参与了宿主促炎症因子的调节。GF-Cyp A通过增强细胞因子的分泌来抑制RGNNV复制。3、环孢素A（Cs A）对病毒的复制影响。环孢素A（Cs A）是一种与Cyp A结合形成Cs-Cyp A复合物的免疫抑制剂。它可以抑制钙调蛋白磷酸酶活性,并通过抑制T细胞活化而导致免疫抑制活性。由于Cs A与Cyp A的这种关系,我们还研究了Cs A在RGNNV感染GF-1细胞过程中发挥的作用。首先观察不同浓度（0,2,4,8,16和32μM）不同时间点（12,24,48,72和96）Cs A作用后GF-1细胞的增殖情况。结果表明,经4μM处理的GF-1细胞在Cs A作用48小时后存活率可达80%以上。因此这一浓度设定为进一步RGNNV复制研究的GF-1细胞的安全浓度。最终发现Cs A在早期阶段（0,1,2和3hpi）不影响RGNNV的复制。而在病毒生命周期的后期（6、12、24和48 hpi）,Cs A可以负调控RGNNV的增殖。最终,当GF-Cyp A在Cs A处理的GF-1细胞中被si RNA干扰并感染RGNNV时,RGNNV的复制在这两个时间点（即感染的早期和后期步骤）都没有得到增强和抑制。结果表明,Cs A对RGNNV的抑制与Cyp A无关。为了考察Cs A处理后RGNNV感染过程中Cs A对细胞因子表达的影响,分析了ISG-15、IL-1β、TNF-2和TNF-α等几种细胞因子表达。研究结果表明,与pc DNA3.1-Cyp A转染过表达和空白对照相比,这些细胞因子在Cs A处理后的RGNNV感染期间的两个时间点都受到抑制。本论文的结果为Cyp A在RGNNV复制过程中发挥的作用提供新的参考,并为防控鱼类RGNNV提供新思路。