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目的:本研究通过体外实验观察PLK1(Polo-like kinase 1)低表达与抗肿瘤药物RITA(Reactivation of P53 and induction of tumor cell apoptosis)对Raji细胞增殖等生物学行为的影响,并探讨其分子机制。方法:通过荧光显微镜观察细胞内绿色荧光表达,以及采用q RTPCR和Western Blot方法验证PLK1稳定低表达的Raji细胞系的有效性。利用CCK-8实验测定不同浓度的RITA药物在给药后24h、48h、72h对Raji细胞的抑制率,以确定RITA的最佳剂量与最佳作用时间点。采用CCK-8、迁移侵袭实验及流式细胞术实验观察PLK1低表达联合RITA对Raji细胞生物学行为的影响。用基因直接测序法检测Raji细胞内p53基因的突变位点。利用q RT-PCR和Western Blot方法检测PLK1低表达与RITA对细胞内PLK1、wtp53、mutp53和ATM等相关分子的变化。结果:1、荧光显微镜观察显示转染组细胞携带绿色荧光比例达90%;q RT-PCR和Western Blot检测表明Raji-PLK1-sh RNA组PLK1基因的m RNA表达和蛋白表达水平较Raji-NC-sh RNA及Raji组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。提示PLK1稳定低表达的Raji细胞系有效。2、CCK-8结果显示:Raji细胞的生长抑制率对RITA具有剂量和时间依赖性,RITA浓度为2μmol/L时对细胞的抑制率趋于最大,RITA最佳剂量2μmol/L,最佳时间点为48h。Raji-NC-sh RNA+RITA(单独使用RITA药物治疗组)、Raji-PLK1-sh RNA(PLK1低表达组)与Raji-PLK1-sh RNA+RITA(两者联合组)较Raji-NC-sh RNA(对照组)的细胞生长速度减慢,差异具有统计学意义(P<0.01);两者联合组较RITA组细胞及PLK1低表达组生长速度减慢,差异具有统计学意义(P<0.05)。3、迁移实验结果显示:RITA组、PLK1低表达组与两者联合组较对照组迁移细胞数减少,差异具有统计学意义(P<0.01);两者联合组较RITA组和PLK1低表达组迁移细胞数减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。4、侵袭实验结果显示:RITA组、PLK1低表达组与两者联合组较对照组侵袭细胞数明显减少,差异具有统计学意义(P<0.01);两者联合组较药物治疗组及PLK1低表达组侵袭细胞数减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。5、流式细胞术结果显示:RITA组、PLK1低表达组与两者联合组较对照组组细胞凋亡率明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01);两者联合组较药物治疗组及PLK1低表达组细胞凋亡率升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。6、基因测序结果显示:Raji细胞内野生型p53存在突变,突变位点分别为5号外显子213号位碱基G突变成A和6号外显子234号位碱基T突变成C。7、q RT-PCR实验结果显示:RITA组、PLK1低表达组及两者联合组与对照组相比,PLK1 m RNA表达下调,差异有统计学意义(P<0.05),两者联合组与RITA组及PLK1低表达组相比,PLK1 m RNA表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05);PLK低表达组及两者联合组与RITA组及对照组相比,wtp53 m RNA表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05),且mutp53 m RNA表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05);RITA组及两者联合组与PLK1低表达组及对照组相比,ATM m RNA表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。8、Western Blot实验结果显示:RITA组、PLK1低表达组及两者联合组与对照组相比,PLK1蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.01),两者联合组与RITA组及PLK1低表达组相比,PLK1蛋白表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05);PLK低表达组及两者联合组与RITA组及对照组相比,wtp53蛋白表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05),且mutp53蛋白表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1、PLK1低表达能抑制Raji细胞增殖、迁移侵袭,并诱导凋亡,可能与p53的表达变化有关。2、RITA能抑制Raji细胞增殖、迁移侵袭,并诱导凋亡,可能与上调ATM的表达有关。3、PLK1低表达和RITA能协同抑制Raji细胞增殖、迁移侵袭,并诱导凋亡。