活性粘细菌的筛选及产物分离鉴定

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20世纪五十年代,人们发现粘细菌(myxobacteria)能够产生抗生素类物质,此后具有生物学活性的粘细菌的分离筛选就成为人们的研究热点之一,尤其是从粘细菌中发现、分离及鉴定新的抑菌、抗肿瘤化合物。本论文首先对实验室保藏的16株粘细菌进行摇瓶发酵,提取其粗产物,采用滤纸片法、生长速率抑制法进行抑菌活性筛选,采用MTT法进行抗肿瘤活性筛选。结果显示,菌株m03粗产物的抑真菌效果最好,抑菌谱较宽,对白色念珠菌、酿酒酵母、烟曲霉、根霉、黑曲霉、青霉、毛霉的抑菌直径分别为14.5mm、12.3mm、8.8mm、14.0mm、10.2mm、13.3mm、11.3mm,对纹枯病原菌和稻瘟霉的抑制率为72.4%和69.3%;菌株m01粗产物的抑细菌活性最好,能够较好的抑制肠炎杆菌、大肠杆菌、巨大芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的生长,抑菌圈直径分别为9.6mm、9.8mm、10.2mm、10.2mm、21.4mm,菌株m11、m01和m16对白血病癌细胞K562抑制活性较强,其IC50值分别为11μg/mL、21μg/mL和21μg/mL。随后我们对抑真菌活性最高的菌株m03和抗肿瘤活性最高的菌株m11进行固体平板和液体摇瓶培养,通过液体培养形态、固体菌落形态、细胞形态等形态学特征及生理生化实验,并结合16S rDNA分子生物学序列分析,最终确定菌株m03为橙色粘球菌(Myxococcus fulvus),菌株m11为粘球菌属(Myxococcus.sp)。分析了两菌株的生长特性,考察了两菌株的生长曲线,确定两菌株的最佳培养条件为:玉米淀粉、酵母浸粉、添加生长因子维生素B12,无机盐选择硫酸镁,最适pH值8.0,最适培养温度为30℃,转速140r/min,接种量10%,种龄56h,装液量60mL(300mL三角瓶)。我们进一步对菌株m03进行大规模发酵,提取粗产物,通过硅胶柱、凝胶柱、反相柱等多种层析分离手段,对粗产物进行分离纯化,最终得到5个化合物M1-M5,并通过核磁共振、质谱等波谱手段进行结构鉴定,发现它们均为已知化合物:M1,quinolin-4-ylmethanol;M2,myxothiazol;M3,4-quinolinecarboxaldehydeoxime;M4,N-(2-phenylethyl)acetamide;M5,N-acetyltyramine,资料显示化合物myxothiazol抑真菌效果较好,具有一定的开发价值。
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