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目的:表达、纯化mHSP110,体外与HPV16E749-57结合,构建二者的复合物;观察以mHSP110为分子伴侣的HPV16 CTL,表位E749-59的免疫原性,为HPV16多肽疫苗的研制提供新的参考。
方法:将mHSP110基因克隆、原核表达和纯化,SDS-PAGE和Western blot鉴定。在热休克状态与E749-57结合形成复合物,HPLC(高压液相色谱)鉴定其结合程度。用mHSP110-E749-57复合物免疫小鼠,IFN-γ胞内染色、MTT法检测小鼠脾细胞中特异CTL;建立TC-1细胞肿瘤模型,观察mHSP110-E749-57复合物的抗肿瘤作用。
结果:克隆 mHSP110片段经DNA序列测定与Genebank中其CDS一致,长度为2577bp;经SDS-PAGE和Western blot证实mHSP110表达、纯化成功,HPLC分析E749-57能够与mHSP110形成复合物。复合物免疫小鼠的脾淋巴细胞中CD8十IFN-γ十T细胞的频率、脾淋巴细胞增值活性明显高于E749-57组、HSP110组和PBS组。复合物免疫小鼠可明显抑制TC-1肿瘤的生长,其他三组基本无抑瘤作用。
结论: mHSP110-E749-57复合物能诱导产生抗原特异性CTL。在TC-1荷瘤小鼠模型上,免疫小鼠后显示出的抑制肿瘤生长的治疗效应。