纳米粒在长期保存过程中,常常表现出结构不稳定性,容易出现粒子溶胀,甚至结构完全破坏的现象。通常,临床检测试剂盒货架期要求不少于6个月,因此结构不稳定性就限制了纳米粒作为标记物的实际应用。据此,本文构建了大分子聚合物为电化学发光（ECL）信号分子钌络合物载体、小分子掺杂的掺杂型纳米粒,拟实现ECL粒子的结构稳定性增强和免疫检测反应的信号放大。首先,合成ECL信号分子三联吡啶钌的环氧基衍生物（Ru-epo）。先通过三氯化钌（Ru Cl₃）和2,2’-联吡啶（bpy）的配位反应得到中间产物二配体,再进一步通过二配体与5,6-二氧-[1,10]菲咯啉（phen-epoxide）的配位反应引入环氧基,得到Ru-epo（Ru（bpy）₂（phen-epoxide）（PF₆）₂）。该配合物具有活泼基团环氧基,环氧基易于和氨基、羧基等发生开环反应。基于此,本文采用两种大分子聚合物,分别是聚乙烯亚胺（PEI）和聚丙烯酸（PAA）作为Ru-epo的载体,构建以大分子聚合物为载体的纳米粒。利用大分子聚乙烯亚胺PEI的氨基与Ru-epo的环氧基的开环反应,PEI上接枝Ru-epo,合成了强疏水性的大分子PEI-Ru。基于疏水作用制备纳米粒o PEI-Ru。进一步掺杂小分子量的聚丙烯酸PAA,疏水作用及静电相互作用结合制备掺杂型纳米粒d PEI-Ru,该掺杂型纳米粒分布均匀,在长达298天的考察时间内维持了良好的结构稳定性。掺杂型纳米粒d PEI-Ru的表面存在大量的残余氨基,而氨基和羧基是常用的标记基团,为了获得表面残余基团为羧基的ECL纳米粒,本文同样以大分子聚丙烯酸PAA为载体,以双官能团试剂乙二胺为连接桥梁,PAA上接枝Ru-epo,合成了另一种强疏水性的大分子PAA-Ru。同样基于疏水作用制备纳米粒o PAA-Ru。进一步掺杂小分子量的PEI,制备掺杂型纳米粒d PAA-Ru,该掺杂型纳米粒分布均匀,在第31天仍然维持了良好的结构稳定性。对两种掺杂型纳米粒的性质与结构进行了表征,证明以大分子聚合物为载体构建结构稳定的纳米粒的可行性。在免疫检测反应体系中,ECL发光分子往往浓度较低,常规检测方法的灵敏度难以满足要求。为了解决这个问题,本文分别从改善共反应试剂体系和检测池两个角度进行研究。一方面,非离子表面活性剂Triton X-100加入常规的三丙胺（TPA）溶液形成新的共反应试剂溶液体系。结果表明相比于使用单独的TPA溶液,添加Triton X-100的溶液体系其发光强度增强可高达22.1倍。另一方面,本文构建了一种新型的电化学发光检测池,与购买的电化学发光检测池作比较,对于同一浓度样本,自制的新型检测池信号强度约是购买的检测池的19倍。同样,自制的检测池的重现性更好,灵敏度高。对于羧基化的三联吡啶钌衍生物Ru-COOH,检测限最低为0.035 f M（S/N=3）。在此基础上,制备的掺杂型纳米粒以钌络合物Ru-COOH作为对照,分别在其最佳抗体标记浓度下比较免疫检测反应的信号,结果表明掺杂型纳米粒d PAA-Ru相比于Ru-COOH信号放大2.3倍,掺杂型纳米粒d PEI-Ru相比于Ru-COOH大概有5.6倍的信号放大,d PEI-Ru NP有更明显的信号放大能力。综上所述,本文制备的掺杂型纳米粒d PEI-Ru具有极好的纳米粒结构稳定性,远远长于临床常用的小分子标记免疫检测试剂盒6个月货架期的要求;同时,具有明显的免疫检测反应信号放大,预示着该ECL纳米粒可以替代小分子钌络合物作为免疫检测的信号标记,表现出了广阔的应用前景。