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第一部分 IC53基因促动脉粥样硬化炎症作用及机制研究 目的:动脉粥样硬化是心血管疾病的主要病理生理基础，是一种由脂质代谢异常、慢性炎症、免疫紊乱、氧化应激、内皮损伤、血管新生及遗传等多种因素作用下发生的一种慢性代偿性炎症反应。遗传因素和环境因素共同导致动脉粥样硬化的发生与进展，鉴定动脉粥样硬化相关基因十分重要。动脉粥样硬化的始动环节是单核细胞粘附、迁移到内皮层下引发炎症反，靶向干预炎症反应将会延缓动脉粥样硬化斑块的形成与破裂。我们前期发现IC53基因在斑块中表达且促进血管新生。因而推测IC53基因能促进单核细胞的炎症反应，以及单核细胞与内皮细胞的粘附、趋化，促进粥样硬化。本研究旨在通过体外实验研究IC53基因促进炎症反应及功能改变，最后分析IC53促进炎症的具体通路和机制。 方法:为验证我们的假设，我们首先利用动脉粥样硬化炎症刺激物ox-LDL刺激内皮细胞后，Westem方法检测IC53表达量的改变。然后，用siRNA干扰IC53基因后，通过细胞粘附实验及transwell实验分析检测IC53在单核细胞与胞外基质的粘附作用及侵袭能力的改变。分别siRNA干扰IC53和腺病毒过表达IC53基因后用qRT-PCR方法检测相关炎症因子MCP-1、趋化因子ICAM、VCAM的表达变化，并选用Affymetrix HTA2.0芯片进行基因表达差异及可变剪接分析。为进一步明确IC53基因对炎症因子MCP-1影响的具体机制，我们通过免疫共沉淀和质谱实验筛选可能与其相互作用的蛋白。 结果:HUVEC细胞在不同浓度的ox-LDL刺激48h后，IC53表达量上升。当ox-LDL浓度为100ug/ml，刺激HUVEC细胞48h后，与对照组相比，IC53的表达量升高到2.4倍。粘附实验表明单核细胞干扰IC53基因后与HUVEC细胞的粘附率下降到0.31倍(P=0.007)，划痕实验表明HUVEC细胞干扰IC53基因后横向迁移率下降到0.84倍(P=0.04)。THP-1细胞干扰IC53基因表达后，MCP-1（降至0.4倍，P＜0.001）、ICAM（降至0.75倍，P＜0.001）以及VCAM（降至0.75倍，P＜0.001）的mRNA水平均下降。而腺病毒Ad5Max-IC53过表达基因IC53后，MCP-1的mRNA水平升高到2.8倍(P＜0.05)。芯片分析结果表明，差异表达的基因中与动脉粥样硬化炎症相关的基因有MCP-1、TLR8、EFTUD2。芯片分析与候选基因分析均发现IC53可调控MCP-1。免疫共沉淀实验(Co-IP)和质谱实验筛选与IC53相结合并调控MCP-1的蛋白，包括热休克蛋白B1、钙磷脂结合蛋白A2、肌球蛋白1E、异硫氰酸盐。 结论:综上所述，我们研究发现IC53基因能通过调控MCP-1促进动脉粥样硬化的炎症反应。我们的研究结果为进一步理解动脉粥样硬化的机制，寻找防治靶点提供了线索。