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背景肝细胞癌是一种全球常见的高致死率肝脏病变，它也是我国主要高发和高致死性癌症之一。临床和实验室研究结果表明，HBV，HCV感染诱导的慢性肝病和肝硬化，黄曲霉毒素和其它致癌化合物污染食品，基因突变等是诱发肝癌的主要病因。它们通过诱导激活多个肝细胞基因的异常表达而促使肝细胞癌变，如c-myc、pRB, p53和热休克蛋白等。热休克蛋白不仅能调节正常细胞内稳态，而且还参与调控多种组织器官癌症（包括肝细胞癌）的发生、转移和药物耐受。Hsf1是调控热休克蛋白表达的主要转录因子，它对一些特异组织的肿瘤发生具有重要的调节作用。如Hsf1在肝癌病人组织中表达升高。敲除小鼠Hsf1能抑制DMBP,诱导的皮肤癌,突变P53诱发的淋巴癌和DEN诱导的肝癌。而Hsf1调控肝癌发生的分子机理还在研究中。近期报道Hsf1能与FILIP-1L（FilaminA interacting protein1-like，also known as down-regulated in ovarian cancer1, Doc1）结合。FILIP-1L能抑制Hsf1蛋白表达和Hsf1介导的热休克反应。目前对FILIP-1L基础生物功能的研究还很局限。FILIP-1L主要表达在不同的上皮组织中。它在卵巢癌细胞系，卵巢癌上皮、HPV16E7永生化的前列腺上皮中表达量降低，参与抑制肿瘤细胞的转移调控。因此，认为FILIP-1L具有抑癌基因的潜在功能，而这方面还需更多的研究资料支持。FILIP-1L在肝癌发生，发展中的作用还没有研究和报道，该课题将以肝癌细胞系和病人肝癌组织为材料，探讨FILIP-1L在肝癌发生中的作用。目的研究FILIP-1L在肝癌中的表达及生物学作用，探讨FILIP-1L相互作用的蛋白及功能。方法1，制备FILIP-1L抗体：将已构建好的质粒pGEX-4T3-FILIP-1L，转化受体菌E.coliBL21，经IPTG诱导表达GST-FILIP-1L（1-288）融合蛋白，采用GST亲和纯化方法，纯化GST-FILIP-1L（1-288）融合蛋白。将融合蛋白免疫动物，制备FILIP-1L多克隆抗体，然后利用硫酸铵沉淀法和亲和层析技术纯化抗体，鉴别抗体特异性；2，利用RT-PCR技术及免疫印迹技术检测不同肝癌细胞系中FILIP-1L基因及蛋白的表达；3，利用脂质体转染技术，建立过表达和沉默FILIP-1L的肝癌细胞株，利用MTT法、细胞迁移实验和软琼脂克隆实验，检测FILIP-1L对肝癌细胞系PLC/PRF/5的生长、迁移和成瘤性的影响；4，利用免疫共沉淀技术，研究FILIP-1L和Rb之间的相互结合及对抑癌的作用机理。结果利用受体菌E.coli BL21，成功诱导表达出GST-FILIP-1L（1-288）融合蛋白，免疫动物后获得高效价多克隆抗体。RT-PCR及免疫印迹检测发现，不同肝癌细胞系均有FILIP-1L基因和蛋白的表达，且FILIP-1L蛋白在肝癌组织的表达量高于癌旁组织。成功建立过表达及沉默FILIP-1L的肝癌细胞PLC/PRF/5，经MTT、细胞迁移实验及软琼脂克隆实验发现，与空载体对照肝癌细胞株PLC/PRF/5比较，过表达FILIP-1L的肝癌细胞株PLC/PRF/5的生长速度减慢、相对迁移距离变小、软琼脂克隆形成数减少；而沉默FILIP-1L的肝癌细胞PLC/PRF/5生长速度增快、相对迁移距离增长、软琼脂克隆形成数增多。免疫印迹结果显示，过表达FILIP-1L的肝癌细胞株PLC/PRF/5及人胚肾细胞株293T中Rb蛋白的表达量减少，而沉默FILIP-1L的肝癌细胞株Rb蛋白表达量增高。免疫共沉淀结果显示，在肝癌细胞系PLC/PRF/5内，Rb与FILIP-1L相互结合。结论获得了GST-FILIP-1L（1-288）融合蛋白，制备了FILIP-1L的多克隆抗体。不同的肝癌细胞系和肝癌组织中均有FILIP-1L表达。FILIP-1L能抑制肝癌细胞系PLC/PRF/5的生长、迁移和成瘤性。在肝癌细胞系PLC/PRF/5内，FILIP-1L与Rb结合，抑制Rb的表达。