β-榄香烯对人宫颈癌Hela乏氧细胞放射增敏作用实验研究

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:liongliong435
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目的:研究β-榄香烯对人宫颈癌Hela乏氧细胞的放射敏感性的影响,探讨其放射敏感性与HIF-1α,VEGF蛋白及mRNA表达的关系。方法:1.MTT法测定不同浓度(12.5μg/ml,25μg/ml,50μg/ml,100μg/ml,200μg/ml,400μg/ml)β-榄香烯对Hela细胞的生长抑制率。2.克隆形成率观察Hela细胞在常氧和乏氧条件下给予不同β-榄香烯药物浓度(10μg/ml,20μg/ml)和不同剂量照射(2Gy,4Gy,6Gy,8Gy)的放射增敏作用。3.细胞免疫组化方法观察常氧对照组,乏氧对照组,乏氧放射(5Gy)组,乏氧单药(20μg/ml)组,乏氧联合组(5Gy+20μg/ml)HIF-1α及VEGF蛋白表达。4.RT-PCR法检测常氧对照组,乏氧对照组,乏氧放射(5Gy)组,乏氧单药(20μg/ml)组,乏氧联合组(5Gy+20μg/ml)HIF-1α及VEGFmRNA的表达。结果:1.β-榄香烯作用Hela细胞24h的半数抑制浓度(IC50)为80μg/ml。2.常氧组对照组与乏氧对照组的细胞存活率无明显差异(P>0.05)。随着放射剂量的增高细胞存活率呈显著性下降(P<0.01)。在相同的放射剂量下,乏氧组较常氧组细胞存活率呈明显增多(P<0.01)。β-榄香烯对常氧组和乏氧组的Hela细胞均有显著抑制作用,并且随着药物浓度的增加,细胞存活率显著下降(P<0.01)。3.实验各组HIF-1α蛋白表达情况:乏氧放射组蛋白表达明显增强(P<0.01),乏氧联合组蛋白表达明显减弱(P<0.01)。乏氧单药组与乏氧对照组比较没有明显差异(P>0.05),乏氧对照组,乏氧放射组,乏氧单药组,乏氧联合组均比常氧对照组蛋白表达显著增强(P<0.01)。VEGF蛋白表达与HIF-1α蛋白表达结果趋势一致。4.实验各组HIF-1αmRNA表达情况:乏氧放射组mRNA表达明显增强(P<0.01)。乏氧联合组mRNA表达明显减弱(P<0.01),乏氧单药组与乏氧对照组比较没有明显差异(P>0.05),乏氧对照组,乏氧放射组,乏氧单药组,乏氧联合组均比常氧对照组mRNA表达显著性增强(P<0.01)。VEGFmRNA表达与HIF-1αmRNA表达结果趋势一致。结论:1.β-榄香烯对Hela细胞的增殖有明显的抑制作用,检测其IC50值为80μg/ml,细胞抑制率随着β-榄香烯浓度的增加而增大,存在药物剂量依赖性。2.β-榄香烯在低细胞毒性浓度下对常氧组和乏氧组的Hela细胞均有放射增敏作用,并且随着药物浓度的增加对细胞的放射增敏作用逐渐增强。3.在相同的放射剂量下,乏氧组较常氧组的细胞存活率有显著性提高,Hela细胞呈现抗放射现象。4.乏氧单药组与乏氧对照组比较HIF-1α,VEGF的蛋白表达和mRNA表达均无明显差异,乏氧放射组两者的蛋白及mRNA表达均呈显著性增高,而乏氧联合组两者的蛋白及mRNA表达均呈显著性抑制。乏氧对照组,乏氧放射组,乏氧单药组,乏氧联合组两者的蛋白及mRNA表达较常氧对照组均有显著性增强。5.β-榄香烯与放射联合作用,可抑制乏氧细胞中HIF-1α,VEGF的蛋白及mRNA表达,抑制肿瘤血管的生成,推测β-榄香烯是通过下调HIF-1α,VEGF的表达来增加对Hela乏氧细胞的放射敏感性。HIF-1α,VEGF可能是β-榄香烯放射增敏作用的靶点。
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