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第一部分脊髓压迫减压后脱髓鞘病变与BDNF表达的相关性研究目的:观察在压迫性脊髓损伤(compressed spinal cord injury,CSCI)后脑源性神经生长因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的表达变化,探讨其对有髓神经纤维脱髓鞘病变的影响,为阐明BDNF在髓鞘保护中的作用提供实验基础。方法:成年Sprague-Dawley雄性大鼠80只,随机将其分成4组:正常组、假手术组和减压组,后者再分为2个亚组,减压组1和减压组2,每组各20只。采用自行设计的大鼠压迫器制作大鼠CSCI模型,模型制作成功后,减压组1和减压组2分别于脊髓压迫1 h和12 h后行脊髓压迫减压手术;假手术组仅作脊髓显露,不作脊髓压迫;正常组不做任何处理。分别于脊髓压迫减压后1、3、7d,采用BBB(Bsso Beattie Bresnahan)评分观察神经功能改变情况;采用锇酸染色(osmic acid staining)观察有髓神经纤维髓鞘变化情况;免疫印迹(Western blot)和免疫荧光双标(double-labelling immunofluorescence)检测BDNF和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)的表达量的变化。结果:正常组和假手术组BBB评分为21分,基本正常,其神经纤维髓鞘结构完整,数量并未减少,与假手术组相比较,两个减压组都出现BBB评分降低和神经纤维脱髓鞘病变,并随着时间的延长,BBB评分逐渐降低,髓鞘逐渐水肿、变性、脱失,而与减压组2相比较,减压组1的BBB评分降低缓慢,髓鞘脱失程度较轻,残存量增多,具有统计学意义(P<0.05);Western blot和免疫荧光双标结果显示:与正常组相比较,两个减压组的MBP和BDNF表达量在也随着时间的延长而逐渐降低,而与减压组2相比较,减压组1的MBP和BDNF降低幅度明显降低,具有统计学意义(P<0.05)。结论:CSCI后脊髓神经纤维发生了脱髓鞘病变,病变程度与BDNF的表达呈负相关;而早期减压可减轻神经纤维的脱髓鞘病变的程度,增加BDNF表达和神经纤维的残存量。提示BNDF对CSCI脱髓鞘具有保护作用。第二部分脊髓压迫性损伤后BDNF的表达变化机制的初步探讨目的:CSCI后,对其的压迫前段、压迫段和压迫后段的BDNF的表达变化进行分节段观察,以便对CSCI后BDNF的表达变化机制进行初步探讨。方法:成年健康Sprague-Dawley雄性大鼠60只,随机将其分成3组:模型组、假手术组和正常组,每组各20只。模型制作方法如第一部分,正常组不做任何处理,假手术组仅作脊髓显露,不作脊髓压迫,模型组作脊髓压迫24h。于CSCI 24 h后分别取出脊髓的压迫前段、压迫段和压迫后段,利用锇酸(osmic acid staining)和LFB(luxol fast blue)染色观察有髓神经纤维变化情况;免疫印迹(Western blot)检测BDNF和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)的表达量的变化。结果:锇酸和LFB结果表明:正常组和假手术组各段有髓神经纤维数量无显著差异,CSCI后24h时,模型组压迫前段(T11)有髓神经纤维数量与假手术组T11比较,无明显变化(P>0.05),而模型组压迫段(T12)和压迫后段(L1)与假手术组相应节段比较有髓神经纤维残存数量降低,具有统计学意义(P<0.05),且模型组压迫段(T12)比压迫后段(L1)有髓神经纤维残存数量降低更为严重(P<0.05);Western blot结果显示:与假手术组相应节段比较,模型组压迫前段(T11)BDNF的表达量升高(P<0.05),MBP表达量未见明显变化,而模型组中压迫段(T12)和压迫后段(L1)的BDNF和MBP表达量明显下降(P<0.05),且模型组压迫段(T12)降低更为显著(P<0.05)。结论:大鼠脊髓压迫性损伤BDNF表达量的变化与神经纤维脱髓鞘病变呈正相关,即BDNF表达量升高对脊髓脱髓鞘病变具有保护作用,而BDNF表达量的减少导致脊髓脱髓鞘病变的发生。模型组压迫前段BDNF的增加,压迫段和压迫后段的减少可能与脊髓受压后阻碍了BDNF的运输有关。