研究背景越来越多的研究证实非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)可进展为终末期肝病及肝细胞癌。NAFLD疾病谱广泛,包括单纯性脂肪变性到由其演变的脂肪性肝炎、脂肪性肝纤维化和肝硬化。NAFLD影响三分之一的一般人群的健康,并涉及到任何年龄和种族,是一般人群第二主要的死亡原因。NAFLD已经显示是重大的公共卫生问题。在中国,NAFLD作为肝硬化的原因之一,也许很快会超过乙型肝炎所致的肝硬化,成为慢性肝病最常见的原因。有效地防治NAFLD可降低终末期肝病的发生率和肝病相关的死亡率,但目前缺乏有效的治疗。因此,探寻有效的治疗NAFLD的药物有非常重要的意义。褪黑素(Melatonin,MEL)主要是松果体合成的吲哚类物质,有许多生理和生化的功能,具有强大的抗氧化特性,能清除活性氧(ROS),能抗衰老、抗癌、抗肝脏损伤和动脉粥样硬化。研究表明MEL对人及实验动物脂质代谢有影响,可降低肝内TG和TC沉积,并对药物性、毒物性、免疫性及胆汁郁积性等急慢肝损害有治疗作用。但迄今为止,未见MEL防治NAFLD的相关报道。考虑到MEL的降血脂、抗氧化和肝脏保护作用,可能对NAFLD有防治作用。因此,设计本课题,在分析大样本体检人群NAFLD易患因素及临床生化参数的基础上,建立高脂饮食诱导的NAFLD大鼠模型,同时观察MEL对其的防治作用及可能机制。目的(1)了解NAFLD在人群中的发病情况以及其临床特点。(2)观察褪黑素对高脂饮食诱导的大鼠NAFLD作用,并对其作用机制进行探讨。方法(1)2006年7月～2006年8月某单位中老年职工体检人群,进行简单调查问卷,调查内容包括年龄、性别、饮酒史、既往疾病史、药物及毒物接触史、病毒性肝炎病史。清晨空腹状态下测量人体测量学指标,包括身高、体重、坐位安静状态下测收缩压和舒张压,并计算体重指数(BMI)。肝脏超声检查。全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、极低密度脂蛋白(VLDL)、空腹血糖(FPG)。所有诊断为NAFLD的患者中,选取临床资料和血标本较为完整的78例患者,进入NAFLD组。体检人群中,临床、生化及B超检查排除脂肪肝、高血压、高血脂、糖尿病等疾病,按照病例对照研究方法,选取年龄和性别相匹配的78例进入正常对照组。放射免疫法(RIA)测定血浆空腹胰岛素水平,计算胰岛素抵抗指数(IRI)。(2)雄性Wistar大鼠50只,随机分成5组,每组10只。正常对照组给予普通饲料,模型组、MEL低剂量组、MEL中剂量组、MEL高剂量组予以高脂饮食12周。各MEL干预组依次给予MEL(含≤1%无水乙醇) 2.5mg·kg-1?d-1,5.0mg·kg-1?d-1和10.0 mg·kg-1?d-1腹腔注射,正常对照组、模型组给予等量生理盐水(含1%无水乙醇)腹腔注射,12周末处死动物,称体重及肝湿重并计算肝指数,进行肝脏病理学检查,生物化学方法测定ALT,AST,TG,TC,FFA水平及血糖和血清胰岛素含量;生物化学方法检测肝匀浆TG,TC,FFA,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量,采用稳态模型评估(HOMA)法公式“HOMA-IRI=(空腹胰岛素×空腹血糖)/22.5”评估胰岛素抵抗指数(insulin resistance index , IRI);稳态寿命荧光光谱法检测肝脏和小肠微粒体甘油三酯转运蛋白(MTP)活性,Western blot检测肝脏和小肠微粒体MTP蛋白表达。免疫组织化学法和Western blot测定肝脏细胞色素P450 2E1(CYP 2E1)的表达。结果(1)1277例受检者中,共检出脂肪性肝病453例,现患率为35.47%(453/1277)。其中男性脂肪性肝病236例,占检出总数52.10%,女性脂肪性肝病217例,占检出总数47.90%,男性脂肪性肝病的检出率明显高于女性(P<0.01)。脂肪性肝病检出率最高的年龄组为51～60岁组,检出率为45.34%;男性中脂肪性肝病检出率最高的年龄组为51～60岁组,检出率为55.29%;女性中脂肪性肝病检出率最高的年龄组为61～70岁组,检出率为44.68%;在≤60岁人群中,男性脂肪性肝病的检出率显著高于女性(P<0.01)。453例脂肪性肝病患者中,非酒精性脂肪性肝病占75.72%(343/453)NAFLD组中,合并代谢综合征中高血压、肥胖、高脂血症和2型糖尿病四种组分2项或2项以上者53例(67.95%,53/78),合并代谢代谢综合征者26例(33.33%,26/78)。与正常对照组比较,NAFLD组BMI, Sbp, Dbp, ALT, AST, TG, TC, VLDL, FPG, FINS和IRI值显著升高(P<0.01)。(2)12周高脂饮食成功复制大鼠NAFLD模型。与正常对照组比较,血清ALT,FPG,AST,TC, FFA值和HOMA-IRI(P<0.05)明显升高;肝匀浆TG, TC, FFA(P<0.05)值明显升高,肝匀浆SOD,GSH-Px水平明显减低(P <0.01,P<0.05),但MDA值升高(P<0.05);肝脏微粒体CYP2E1的表达和蛋白含量明显增加(P<0.05);肝脏和小肠微粒体的MTP活性和蛋白表达量明显降低(P <0.05);模型组大鼠肝湿重及肝指数明显增高(P<0.01),肝细胞呈中-重度脂肪变性,肝小叶内见灶性炎细胞浸润和点状坏死。药物干预组中以MEL中、高剂量组药理作用明显。与模型组比,各MEL干预组大鼠肝细胞脂肪变性及炎性细胞浸润有不同程度的改善,多呈轻-中度脂肪变性,其中MEL中等剂量(5.0mg/kg)及高剂量(10.0mg/kg)干预显著改善NAFLD大鼠肝脏病理变化(P<0.001),明显减低炎症活动度积分(P<0.05)。与模型组比较,MEL中、高剂量组肝湿重及肝指数明显减低(P<0.05);高剂量MEL干预组血清ALT和AST降低有显著差异(P<0.05);高剂量MEL干预组肝脏TC、TG(P<0.01, P<0.05)和中等剂量干预组肝脏TC﹙P<0.05)降低有显著意义;MEL低、中、高剂量干预组血清FFA以及MEL中、高剂量干预组肝组织FFA降低均有显著差异(P<0.05); MEL中、高剂量干预组肝脏CYP 2E1表达和高剂量组肝脏微粒体CYP 2E1蛋白量降低有显著意义( P<0.05);MEL中、高剂量干预组肝脏微粒体MTP活性升高,但没有显著差异; MEL高剂量干预组大鼠小肠微粒体MTP活性升高有显著差异( P<0.05); MEL高剂量干预组肝脏和小肠微粒体MTP蛋白表达升高有显著差异( P<0.05)。结论1.本次体检人群中脂肪性肝病检出率为35.47%,其中NAFLD占75.72%。NAFLD发病与肥胖、高脂血症、糖尿病和代谢综合征关系密切。2.长期高脂饮食诱导的NAFLD大鼠肝脏和小肠MTP活性及蛋白表达下降。3.MEL明显改善高脂饮食诱导的NAFLD大鼠肝组织形态学变化、血清转氨酶以及肝脏脂质,对NAFLD的形成有明显的防治作用,且与剂量呈正相关。其作用机制可能与MEL改善氧应激,抑制脂质过氧化反应,干预肝脏和小肠脂质代谢有关。