基于核酸酶和杂交链式反应检测白血病融合基因的超灵敏电化学新方法

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慢性粒细胞性白血病(CML)是一种由多能造血干细胞肿瘤增生引起的恶性克隆骨髓增生性疾病,对人类的生命健康具有极大威胁。由于大多数CML患者在患病初期的3-5年内不会有明显的症状,因此CML的早期诊断依然存在困难。根据世界卫生组织(WHO)2016年修订的白血病分型标准,白血病融合基因是该疾病发生发展的关键性驱动因素,而且特征性的融合基因检查结果也是白血病分子生物学诊断的重要依据。因此特异性的融合基因位点既是白血病诊断分型、疗效监测的重要标志物,也是白血病精准医疗需要检测的关键。本课题建立了一种基于多部件核酸酶(MNAzyme)和单链脱氧核糖核酸链(ssDNA)辅助级联杂交反应的检测BCR/ABL融合基因的超敏特异性电化学检测方法。在Mg2+存在下,两条拆分核酶序列通过对目标物的特异性识别和互补结合,形成稳定的活性MNAzyme,引发对底物发夹探针(HP)的剪切反应裂解茎环产生多条触发链。这些触发链可以与固定在金电极表面的捕获探针以及生物素化的杂交探针P1和P2通过碱基互补配对连接,从而引发电极表面的非均质ssDNA辅助的级联杂交反应。链霉亲和素修饰的碱性磷酸酶(ST-AP)可以通过与特异的亲和反应与富含生物素的杂交长链复合体结合,最终通过碱性磷酸酶催化反应底液中的α-萘基磷酸酯(α-NPP)产生可识别的电化学信号。该生物传感器对目标基因具有高灵敏度和特异性,其检测限可达到21.9 fM,且传感器已成功应用于复杂样品中目标BCR/ABL基因的检测。因此该生物传感器设计策略为慢CML分子诊断融合基因的超灵敏检测提供了一个简单实用的新思路。
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