论文部分内容阅读
头孢菌素作为一类广谱高效抗菌药,在畜牧兽医领域被广泛用于动物疾病的预防与治疗。由于部分养殖单位不合理用药导致其残留现象十分严重,人类食用头孢菌素残留的动物性食品会对身体造成一定的危害甚至产生严重的过敏反应,所以对动物性食品中此类抗生素残留的有效监测已成为保障动物性食品安全的一个重要环节。为适应残留检测的需要,建立高选择性、高效率、操作简便、环境友好的头孢菌素残留分析方法成为研究热点。试验选择头孢噻肟(CTX)和头孢羟氨苄(CFR)为对象,进行了以下研究:1.高效毛细管电泳(HPCE)同时检测头孢噻肟和头孢羟氨苄方法的优化通过考察缓冲液类型、缓冲液离子浓度、pH及运行电压和温度等因素对两种药物分离的影响,设计正交实验,优化后HPCE分析条件为:浓度为40mmol/L (pH7.5)的硼砂/盐酸缓冲体系,分离电压为20kV,柱温为20℃,二极管阵列检测器(PDA),检测波长为210nm。在此条件下,两种药物在12min内完全分离;在5～100μg/mL范围内线性良好,相关系数(R2)分别为0.9994和0.9998;日内、日间变异系数(峰面积)均小于4%。2.头孢噻肟分子印迹聚合物(MIPs)的合成与评价试验以头孢噻肟(CTX)为模板分子,α-甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂合成了MIPs。同时研究了模板分子、功能单体、交联剂的用量及致孔剂种类、用量和聚合温度等因素对MIPs制备的影响。最后设计正交实验,优化聚合条件,并通过结合实验和Scatchard分析对制备的MIPs进行评价。结果表明:MIPs最佳聚合条件为模板分子CTX为0.2mmol,功能单体MAA为1.2mmol,交联剂EDMA为30mmol,致孔剂为4mL甲醇/乙腈(1/1),聚合温度为50℃;MIPs在识别CTX的过程中存在两类结合位点,低亲和力结合位点解离常数KD1=0.367mmol/L,最大表观结合量Qmax1=6.06μmol/g,高亲和力结合位点的解离常数KD2=6mmol/L,最大表观结合量Qmax2=36μmol/g;MIPs对CTX的结合量明显大于空白聚合物,且对结构相似的同类药物CFR也有一定的吸附能力。3.头孢噻肟分子印迹固相萃取(MISPE)柱的制备及MISPE法的建立以优化条件下合成的MIPs为填料,聚丙烯固相萃取柱空管为柱体,制备MISPE柱;通过对淋洗剂、洗脱剂及上样溶剂的种类及用量进行筛选和优化,建立MISPE富集、净化CTX的方法,回收率可达79%～86%。4. MISPE-HPCE检测牛奶中CTX的应用以牛奶为基质,通过CTX标准品添加,MISPE-HPCE检测,回收率可达79%～85%,且能有效除去背景杂质,满足兽药残留分析要求。