背景肺癌是全球癌症相关死亡的主要原因之一,为社会及家庭带来了沉重的经济负担,肺癌以非小细胞肺癌（NSCLC）为主,NSCLC中病理亚型以腺癌和鳞癌最常见,具有临床症状缺乏特异性、诊断难度大、确诊较晚、治疗反应差等特点。现有的肺癌诊断指标、预后评测指标以及早期筛查指标包括癌胚抗原（CEA）、糖类抗原125（CA125）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）等,其均存在敏感性及特异性较差的特点,因此目前急需寻找更理想的肺癌诊断标志物。人体微生物（包括细菌、真菌）与宿主共存,在宿主发育、营养、免疫、代谢、肿瘤发生等方面起着重要作用,与人体健康息息相关。高通量测序技术使得人类与微生物（包括细菌、真菌）的相互关系的研究发展迅速,目前在抑郁症、胰腺癌、结肠癌、胃癌等均发现有微生物的改变。口腔微生态菌群拥有仅次肠道第二大微生物群,在人体免疫、炎症系统等各方面起重要的作用。漱口水检测作为一种检测口腔微生物的非侵入性检测方式,具有取材方便,接受度高,可重复性,适合大范围普及等优势,且目前发现口腔微生物在多种恶性肿瘤中均有显著变化。目前对于口腔细菌变化与非小细胞肺癌的关系研究较多,而真菌相关研究较少。因此,我们设计了本课题。目的探索健康对照组与非小细胞肺癌（腺癌及鳞癌）患者之间的口腔细菌、真菌及代谢物的差异,筛选出与非小细胞肺癌相关的潜在标志物。方法选取于上海市2021年3月至2022年1月间在第二军医大学附属长征医院行健康体检的健康体检者作为健康对照组同时将在同一医院治疗且经过经术中冰冻和（或）术后病理确诊的非小细胞肺癌住院患者作为实验组,选取两组的漱口水样本,应用Nova Seq 6000测序技术平台对16S r RNA基因V3-V4区、真菌ITS2区进行2×250bp的双端测序,并使用生物信息学分析方法分析口腔微生物菌落的结构组成、口腔微生物菌落的相对丰度、口腔微生物菌落的多样性变化以及两组之间的口腔微生物菌落差异。基于此,在两组样本中分析出相对丰度具有显著差异的口腔微生物种属,为寻找其潜在生物标志物,进行ROC曲线的绘制在两组差异口腔菌群中筛选出具有良好诊断效能的特征菌群。最后,我们利用液相色谱质谱法（LC-MS）的技术方法,对非小细胞肺癌患者及健康对照组的漱口水进行非靶向代谢组学研究,从中筛选并挖掘出与非小细胞肺癌相关的特异性差异代谢物,再进行ROC曲线的绘制从两组差异代谢物进行筛选,挑选出具有良好诊断效能的特征代谢物。结果一、健康对照组、非小细胞肺癌患者漱口水细菌菌群特征与比较研究结果（1）在两组之间进行口腔细菌菌群比较,非小细胞肺癌患者口腔细菌菌群的alpha多样性指数降低。两组在物种丰度上比较,在菌门水平上,非小细胞肺癌组口腔中变形菌门（Proteobacteria）、放线菌门（Actinobacteria）丰度显著升高;而口腔中厚壁菌门（Firmicutes）显著降低;在菌属水平上:伯克氏菌属（BurkholderiaCaballeronia-Paraburkholderia）显著增高,而奈瑟氏菌属（Neisseria）、链球菌属（Streptococcus）、嗜血杆菌属（Haemophilus）、罗氏菌属（Rothia）显著降低。（2）口腔细菌菌群主要有4种优势菌门是:变形菌门（Proteobacteria）、厚壁菌门（Firmicutes）、拟杆菌门（Bacteroidetes）以及放线菌门（Actinobacteria）。口腔细菌菌群主要有6种优势菌属:奈瑟氏菌属（Neisseria）,链球菌属（Streptococcus）,嗜血杆菌属（Haemophilus）,罗氏菌属（Rothia）,普氏菌属（Prevotella）及韦荣球菌属（Veillonella）。（3）结合LEf Se分析得非小细胞肺癌患者中增高的变形菌门（Proteobacteria）、副伯克氏菌属（Paraburkholderia）、鞘脂单胞菌属（Sphingopyxis）在两组间差异显著。利用3种物种对对照组和非小细胞肺癌患者进行ROC诊断分析,发现伯克氏菌属（Burkholderia-Caballeronia-Paraburkholderia）、鞘脂单胞菌属（Sphingopyxis）对鉴别非小细胞肺癌的诊断价值较高。二、健康对照组、非小细胞肺癌患者漱口水真菌菌群特征与比较研究结果（1）在两组之间进行口腔真菌菌群比较,非小细胞肺癌患者与对照组alpha多样性指数无明显差异,beta多样性分析两组差异显著。与对照组进行物种丰度分析,在菌门水平上,相对丰度较高的2种菌门:子囊菌门（Ascomycota）（两组人群菌群构成占比分别为Cancer组:60.55%;Control组:35.34%）,担子菌门（Basidiomycota）（两组人群菌群构成占比分别为Cancer组:32.17%;Control组:13.63%）,且均有统计学意义（P＜0.05）。而接合菌门（zygomycota）丰度在对照组显著增高（两组人群菌群构成占比分别为Cancer组:0.27%;Control组:32.98%）。在菌属水平上:两组间真菌种类和丰富度差异显著,其中放射毛霉（Actinomucor）、红曲霉（Monascus）特异性存在于对照组,而念珠菌属（Candida）特异性存在于非小细胞肺癌组。（2）口腔细菌菌群主要有2种优势菌门是:在菌门水平上,相对丰度较高的2种菌门:子囊菌门（Ascomycota）（两组人群菌群构成占比分别为Cancer组:60.55%;Control组:35.34%）,担子菌门（Basidiomycota）（两组人群菌群构成占比分别为Cancer组:32.17%;Control:组13.63%）。（3）结合LEf Se分析得属水平上,非小细胞肺癌患者中马拉色菌属（Malassezia）、念珠菌属（Candida）、隐球菌属（Cryptococcus）、帚枝霉属（Sarocladium）、毛球腔菌属（Setosphaeria）、Setophoma在两组间差异显著。利用6种物种对非小细胞肺癌组和对照组进行ROC诊断分析,发现念珠菌属（Candida）、隐球菌属（Cryptococcus）对鉴别非小细胞肺癌有诊断价值。三、健康对照组、非小细胞肺癌患者漱口水代谢物特征与比较研究结果（1）共收集53例漱口水研究样本（其中包括对照组15例,癌症组38例）,对两组样本进行非靶向代谢组学分析。（2）通过漱口水样本研究,在非小细胞肺癌组中筛选出有意义的差异代谢物主要有50个（其中45个物质表达下降,5个物质表达上升）,其中在非小细胞肺癌组降低的代谢物以脂质代谢产物（estrone glucuronide）、氧化代谢产物（Octanoylglucuronide）、有机酸类物质（Kinetensin 4-7）等为主,升高以有机硫化合物（Methyl 2-propenyl tetrasulfide）、杂环化合物（Xanthine）等为主。非小细胞肺癌患者漱口水样本中主要紊乱的代谢通路包括脂代谢、t RNA氨酰化、小分子物质转运等。（3）通过漱口水样本研究,筛选到4个AUC大于0.8的口腔内差异代谢物。4个有潜在预测价值的口腔代谢物分别为:去甲变肾上腺素（normetanephrine）、胆绿素（biliverdin）、泛酰巯基乙胺（pantetheine）及octanoylglucuronide。结论我们利用Nova Seq6000高通量二代测序技术平台及生物信息分析平台,通过对健康对照组、非小细胞肺癌组漱口水样本进行分析,发现汉族人的口腔细菌菌群主要包括4大菌门和6大菌属。在非小细胞肺癌患者中口腔细菌菌群的alpha多样性降低,其中一部分菌门、菌属的相对丰度会升高,而另有一些会降低。同时,伯克氏菌属（Burkholderia-Caballeronia-Paraburkholderia）、鞘脂单胞菌属（Sphingopyxis）对与鉴别非小细胞肺癌可能具有重要意义。通过分析健康对照组、非小细胞肺癌漱口水样本了解到,汉族人的口腔真菌菌群中主要包括2大菌门,子囊菌门（Ascomycota）,担子菌门（Basidiomycota）。两组间alpha多样性无明显差异,beta多样性差异显著,健康对照组和非小细胞肺癌组真菌属水平上差异显著,且念珠菌属（Candida）、隐球菌属（Cryptococcus）对鉴别非小细胞肺癌具有重要意义。我们利用液相色谱质谱法（LC-MS）对漱口水样本进行非靶向代谢组学的研究,通过分析健康对照组及非小细胞肺癌肺癌患者的漱口水样本了解到,肺癌患者有部分代谢通路紊乱,两组间多个差异性代谢物具有潜在预测价值。