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角叉菜(Chondrus ocellatus)是一种海洋红藻,其水溶性提取物卡拉胶是一类具有多种生物活性的硫酸酯多糖。本文以角叉菜卡拉胶作为原料,采用化学合成的方法为角叉菜卡拉胶接枝适当基团,得到了硫酸酯化、乙酰酯化及乙酰硫酸酯化的卡拉胶衍生物,并对角叉菜卡拉胶及其衍生物进行了体外免疫调节活性和抗氧化活性研究。主要研究结果如下:
1.角叉菜卡拉胶的分子修饰及理化性质测定利用超声破碎的方法从角叉菜中获得了卡拉胶粗提物,该提取物经0.3mol/LKCl分级处理后得到λ-卡拉胶和κ-卡拉胶。采用氯磺酸-FA-吡啶法、吡啶/醋酸酐法对两者进行分子修饰,分别获得了硫酸酯化卡拉胶、乙酰酯化卡拉胶;乙酰化修饰后的卡拉胶,再经氯磺酸-吡啶法处理,得到乙酰硫酸酯化卡拉胶。利用液相、红外等手段对上述衍生物的结构与理化性质进行了测定。
2. 角叉菜卡拉胶及其衍生物的抗氧化活性通过建立体外化学模拟体系和鼠肝损伤模型对角叉菜卡拉胶及其衍生物的抗氧化活性进行评价,结果表明:(1)角叉菜卡拉胶及其衍生物均具有较强的清除羟自由基能力,在一定浓度范围内,其清除能力具有剂量依赖关系,对OH·的清除率与浓度呈正相关性;硫酸酯化λ-卡拉胶和κ-卡拉胶对OH·的清除效果明显优于卡拉胶原糖,其中,以硫酸化λ-卡拉胶对OH·的清除效果最好,在浓度为0.33 mg/mL时其清除率为83.37[%]。(2)经过衍生化处理后λ-和κ-卡拉胶对超氧阴离子O2-·的清除作用增强,特别是乙酰硫酸酯化衍生物的活性明显增高,在0.33 mg/mL 浓度时,清除率达到80.92[%]。(3)衍生化λ-和κ-卡拉胶均可抑制鼠肝匀浆脂质的过氧化作用,特别是乙酰硫酸酯化λ-卡拉胶对脂质肝匀浆过氧化的抑制作用随浓度的增加而增强,在0.33mg/mL 浓度时,抑制率为90.31[%],但对有机自由基的清除率较原糖无明显差异。
3. 角叉菜卡拉胶及其衍生物的体外免疫活性利用小鼠脾淋巴细胞及小鼠单核-巨噬细胞增殖、吞噬中性红以及释放NO实验对角叉菜卡拉胶及其衍生物的体外细胞免疫调节活性进行了评价,结果表明:(1)λ-和κ-卡拉胶及其衍生物均能明显促进巨噬细胞RAW264.7和脾淋巴细胞的增殖活性,且在一定的浓度范围内呈现对剂量的依赖性,相同剂量条件下乙酰硫酸酯化衍生物的促进效果优于硫酸酯化和乙酰酯化衍生物。(2)λ-和κ-卡拉胶及其衍生物具有促进巨噬细胞释放NO及吞噬中性红的能力,其中以乙酰硫酸酯化的效果最好。