研究者们关心适应能力强的中度嗜盐菌是由于其能够于较宽的Na Cl含量范围内生存,并对养分的要求不是很苛刻。一般来说,微生物分泌的蛋白酶实质上是细胞外的,所以和从其他来源而得到的蛋白酶相比较,简化了酶的下游加工。众多因素都可以影响蛋白酶的性能,如酸碱度值,离子强度,热度等。由于工业对蛋白酶的需求非常大,研究者们不断探索蛋白酶的不同方面。本论文研究的目的在于为工业生产与应用提供了新的菌株与酶试剂。众多研究者们认同生物法处理高盐度污水在技术上是可行的,是由于嗜盐菌在高盐度条件下催化水解污染物是非常有效率的。利用嗜盐微生物作用于高盐度污水因为其成本低、见效快等特点,在改善废水、高盐度污水对环境所造成的危害等领域拥有着美好的未来。微生物拥有生长繁殖快、种类多、培养容易、可大批量释放与提取蛋白酶的特点,所以微生物分泌的蛋白酶的筛选与应用探索是微生物水解和转化方面的一个非常重要的工作。每一种菌株都有它自己特有的物理化学条件与养分需要,以最大程度的合成蛋白酶。对于不一样的微生物分泌的蛋白酶没有确定的共同培养基,而且每一种微生物或者菌株拥有其自身的最大酶生产要求,有利于最适生长的条件将造成最高的酶产量并不总是正确的。各研究者报道了促进蛋白酶产生的培养条件与促进细胞生长的培养条件不同。本论文使用的研究方法有利用菌种筛选固体培养基分离出菌株;通过肉眼及扫描电子显微镜观察菌株形貌特征结合16S r DNA序列结果进行分析比对来鉴定菌株;通过菌株的生长情况将分离出的菌株进行分类;通过福林酚法来测量蛋白酶的活力;利用控制变量法测量热度、酸碱度、Na Cl浓度对蛋白酶活力的影响情况;利用控制变量法找到此菌株的最佳发酵时间、最佳氮源、最佳碳源、最佳发酵Na Cl浓度及金属离子对酶活力的影响,从而确定此菌株发酵培养基的成分。本文的主要研究成果如下:(1)本实验从浙江省舟山市双峰盐场筛选出了一株既分泌蛋白酶又嗜盐的菌株。在扫描电子显微镜下观察菌呈现杆的形态,结合16S r DNA全序列结果及菌株形貌特征确认为特氏盐芽孢杆菌(Halobacillus trueperi),随即命名为B1(登录号:MK367780)。经研究,该菌株最适生长Na Cl浓度为5%,于20%盐含量下也能生存,但是B1在0%的Na Cl浓度下难以生长,表明其为中度嗜盐菌。(2)对该菌分泌的蛋白酶做酶学性质探究,测得B1菌分泌的蛋白酶是中温蛋白酶因为其活力的最佳热度在50摄氏度,是中性蛋白酶因为其最高蛋白酶活力在p H 7.5处。菌株B1所产蛋白酶活力随Na Cl浓度升高将受到一定程度地抑制。Na Cl含量达到8%后,剩余的活力达到61.0%,具有良好的耐盐性。(3)菌株B1在发酵8 h时蛋白酶活力达到最大值。培养液氮源的优化结论揭示了,脱脂奶粉为最佳氮源。葡萄糖,麦芽糖,蔗糖,果糖抑制作用显著。如果培养液中盐含量升高,那么分泌的蛋白酶活力先变大后降低,并在7.5%Na Cl浓度下酶活达到最大。Cu2+,Zn2+,和Ni2+离子对菌株B1所产蛋白酶活力的影响为显著抑制。