海洋抗菌活性物质产生菌的筛选及系统分类研究

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随着抗生素的广泛使用,微生物的抗药性逐渐增强。与此同时,环境污染的加剧,社会和人文的变迁使人类的免疫力不断下降,新的致病菌和条件致病菌不断出现,这种微生物日益增强的抗药性和新致病菌的不断出现已经成为一个严重的社会问题。要解决这一问题,最有效的办法就是加大力度,筛选开发新的抗生素。海洋以其独特的生境条件已成为新抗生素的重要来源。 我们分三次从东海海域采集了海泥,海水以及木鲢、鳗鱼等11种海洋鱼类的鳃、胃肠道,分离共附生微生物。以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉和啤酒酵母作为指示菌,用滤纸片法筛选抗菌活性物质产生菌;通过最小抑菌浓度(MIC)法和琼脂扩散法对筛选菌株进行抗菌活性测定,计算筛选菌株发酵液中的抗生素相对效价;然后通过生理生化试验和16SrDNA的部分基因序列的测定,对其中有代表性的菌株进行分子鉴定和系统发育分析。 结果表明,从样品中分离到的微生物绝大多数是细菌,只有几株放线菌,没有分离到霉菌。根据菌落形态特征,从分离的细菌中挑选366株,通过抗菌试验,筛选到抗菌活性物质产生菌34株。选取抗菌活性强且菌落特征有代表性的菌株14株,进行分子鉴定和系统发育分析。结果显示,14个菌株中有2个(Brevibacteriumhalotolerans,Kocuriarhizophila)属于高(G+C)%的革兰氏阳性菌;7个(Bacillusmarinus,Bacilluscereus,Bacillusvietnamensis,Bacillussphaericus,Bacillusthuringiensis,Staphylococcuskloosii,Staphylococcussaprophyticus)属于低(G+C)%的革兰氏阳性菌;其余5个(Proteuspenneri,Proteusmirabilis,Citrobacterfreundii,Shigellaboydii,Psychrobacterfaecalis)为γ-变形菌亚门的菌株。序列分析表明绝大部分菌株与NCBI中最相近菌株的相似性都很高,只有菌株L20与Brevibacteriumhalotolerans的序列相似性为96.3%,但由于比对序列长度偏短,还需要进一步进行全序列测定来确认,不过菌株L20的抗菌活性比较突出;此外,菌株H1(Kocuriarhizophila)和5个γ-变形菌亚门的菌株也具有较强的抗菌活性,在其它研究报道中很少出现,因此这7个菌株及其所产生的抗菌活性物质具有进一步研究的价值。
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