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组织蛋白酶B和组织蛋白酶L是半胱氨酸蛋白酶木瓜蛋白酶样家族的主要成员,在生物体普遍存在,并具有广泛的生物学功能。在寄生虫学领域,组织蛋白酶B和组织蛋白酶L已在复顶亚门多种原虫报道,并证明参与了虫体入侵、免疫逃避、移行、脱囊、摄取营养等多种生命过程,但在柔嫩艾美耳球虫鲜有研究报道。本研究利用RT-PCR和RACE技术成功克隆了编码柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)组织蛋白酶B(Etcat B)和组织蛋白酶L(Etcat L)基因的cDNA序列。扩增获得的EtcatB的序列长1539bp,含有完整的开放性阅读框(ORF),编码512氨基酸,与弓形虫(Toxiplasma gondii)的组织蛋白酶B(序列号：EPR63374.1)同源性最高,可达49%；Etcat L的序列全长2176bp,含1413bp的开放性阅读框,编码470aa,与和缓艾美耳球虫(Eimeria acervulina)和弓形虫cathepsin L(序列号：CDI79476和ABY58967.1)的同源性为49%和47%。利用原核表达系统成功克隆和纯化了Etcat B和Etcat L重组蛋白,并通过明胶酶谱法初步证实二者均有活性。重组蛋白Etcat B和Etcat L免疫小鼠,获得高免血清,利用免疫荧光技术,在激光共聚焦显微镜下观察Etcat B在柔嫩艾美耳球虫子孢子中定位于虫体顶部。利用real-time PCR和western-blot的方法检测了Etcat B和Etcat L在球虫发育不同阶段和孢子化不同阶段的表达水平,结果显示Etcat B在配子体和裂子体时期表达较高,未孢子化和子孢子阶段表达相对较低,孢子化过程中表达逐步增加；Etcat L主要在裂殖子和配子体阶段表达,孢子化过程中Etcat L在初期表达增加。对Etcat L的酶动力学研究显示,重组蛋白在pH5.5含10mM DTT的反应溶液中对Z-Phe-Arg-AMC的Km值为8.9μM, Vmax值为5.7RFU/s-μM,对木瓜蛋白样半胱氨酸蛋白酶特异性抑制剂E64的IC50为65.32+3.02nM。温度对酶活影响实验显示,.重组蛋白在25℃-50℃之间均有活性,在42℃活性最高,这与柔嫩艾美耳球虫的肠道寄生虫环境相适应。Etcat L的免疫保护实验显示,与感染组相比,免疫100μg和200μg rEtcat L后体重损失减少率分别是48.7%和57.9%,病变记分减少率为25.0%和47.2%,卵囊相对产量39.5%和15.5%。表明EtcatL对鸡抗球虫感染有一定的保护力,可作为一种有效的亚单位疫苗的候选分子。Etcat B和L基因的克隆和表达等方面的初步研究,为进一步探究该基因的在鸡球虫入侵及其它生物学功能中所起的作用提供了理论基础。