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硫酸软骨素是一种酸性粘多糖,通常以糖蛋白的形式存在于动物体内,是由氨基已糖和葡萄糖醛酸为基本单元构成的聚合体。硫酸软骨素具有调节免疫和脂类代谢、预防感染和心血管疾病等多种生理作用,在医药、食品、化妆品等领域应用前景广泛。分子印迹是指一种可以合成对指定分子具有专一性识别位点的聚合物的技术。分子印迹技术的基本原理是将需要印迹的模板分子与功能单体、交联剂溶于溶剂中,通过聚合反应形成复合物,洗脱除去模板分子,得到记录模板分子构型空穴的刚性聚合物,且功能基在立体空穴中的排布上与目标分子具有互补的结构,因此对模板分子有着选择性和吸附能力被广泛应用于分离过程(包括色谱分离、毛细管电色谱分离、膜分析与固相萃取)、生物传感器、人工模拟抗体、模拟酶催化等领域。论文研究了采用微波萃取法提取复方硫酸软骨素片中的Chs-C,以Chs-C的提取率为考察指标,在单因素试验基础上进行正交试验,确定微波萃取最佳条件。微波萃取最佳条件为:萃取功率为595 W,浸提时间90 s,固液比为1:75。在此条件下,提取率可达4.1%。以高效液相色谱法为测定方法,在流动相为乙腈-0.5%磷酸-异丙醇,检测波长209 nm,柱温40℃,样品中Chs-A和Chs-C组分分离良好,峰型较为对称。本文采用硫酸软骨素作为模板分子,以丙烯酰胺(AM)为功能单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯(EDGMA)为交联剂,其物质的量之比为1/n:4:20(n=60),以乙睛/水(85:15)为溶剂、偶氮二异丁睛(AIBN)为引发剂,采用60℃加热聚合的方法,制备出吸附性能良好的硫酸软骨素印迹分子聚合物MIPs。通过红外和紫外光谱和透射电镜分析,表征印迹聚合物结构和反应机理。论文研究了乙醇沉淀法和分子印迹法纯化硫酸软骨素的效果。可知,乙醇沉淀法中当硫酸软骨素粗体物溶液的固形物浓度为18%(w/v)、NaCl浓度为3%(w/v)、pH为6.4、醇沉体系的乙醇浓度为70%(v/v),重复沉淀4次时,纯化物的葡萄糖醛酸含量可达44.3%(w/w),硫酸软骨素得率为45%(w/w)。分子印迹法对纯化硫酸软骨素具有很好的选择性和较高的吸附和解吸性能。通过对其吸附等温线、吸附时间、溶液浓度曲线和Scatchard方程评价分析得知:硫酸软骨素溶液浓度2.5mg/ml,40℃恒温反应时间7-8h时,吸附效果较好。表明在MIP中主要存在着两类不同能量的结合位点。根据Scatchard方程分别计算出来两类结合位点的离解常数kd和最大表观结合量Qmax。对于高能结合位点,kd1和Qmax1分别为9.58×10-4 mol/L和6.67(?)/g;对于低能结合位点,kd2和Qmax2分别为5.38×10-3 mol/L和25.87 (?)/g。与传统的乙醇沉淀法相比较,分子印迹法可以具有高度选择性和亲和性,聚合物制备过程简单、配套、大大缩短了预处理时间,减少了溶剂的大量使用和暴露,符合绿色化学的原则,易于与其他技术一起联用,实现自动化在线分析。