食用菌液体发酵合成有机硒的研究

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硒元素是生物有机体必需的微量元素,它能促进机体生长与解毒重金属等生物功能。然而我国硒的分布不均匀,导致很多人存在缺硒现象,无机硒由于毒性大,生物活性低,人体对其吸收效果不理想。而有机硒的特点正好是无机硒所欠缺的,而且其毒性甚微。因此对于补硒而言,具有相当好的效果。本研究利用微生物转化法合成有机硒,利用酿酒酵母和元宝灵芝作为富硒的载体,制备富硒酵母和富硒灵芝,硒含量满足规定的要求,可以为后期工业化加工富硒食品奠定基础。本论文研究了元宝灵芝的液体发酵条件,以及酿酒酵母富硒和元宝灵芝富硒培养过程硒的补加时间并确定了添加亚硒酸钠的浓度。检测了两种菌株中有机硒与总硒的含量,并研究了硒多糖与硒蛋白的提取工艺。检测了硒蛋白与硒多糖的含量,研究了二者的抗氧化性质。首先测定菌株胞内多糖含量和对硒的抗性筛选得到一株元宝灵芝YBF-2,在含有亚硒酸钠的平板上利用梯度培养,最后筛到酿酒酵母菌株NY-1。以胞内、外多糖两个参数指标,通过正交试验明确了元宝灵芝YBF-2的液体发酵的最优培养基为:葡萄糖 20g/L,酵母浸粉 10g/L,KH2PO41g/L,MgSO40.5g/L,VB150mg/L。使用单因素方法明确温度28℃,pH6.5,接种量为5%,转速220 rpm当作元宝灵芝摇瓶发酵的最优培养条件。其次,以胞内硒多糖和胞内硒蛋白为指标,分别确定了元宝灵芝YBF-2富硒条件下硒多糖的提取工艺和硒蛋白的提取工艺。水煮法得到硒多糖的最优工艺方法:固液比1:60,温度以100℃最佳,时间以2h最佳,乙醇含量的百分比以80%最佳,次数以3次最佳。元宝灵芝YBF-2中硒蛋白的最优提取工艺:氢氧化钠溶液浓度为O.1mol/L,料液比为1:20,温度以60℃最佳,时间以2h最佳,次数以3次最佳。同时还测定了硒蛋白的等电点为4。然后,通过加硒培养确定了酿酒酵母NY-1亚硒酸钠添加浓度为20 mg/L,加入时间在8 h。YBF-2亚硒酸钠终浓度为12 mg/L,加入时间在16 h。富硒酿酒酵母NY-1的总硒含量为1540.3 mg/kg,有机硒含量为1496.8 mg/kg。有机硒所占百分比为97.2%。富硒元宝灵芝YBF-2总硒是338 mg/kg,有机硒是331.42 mg/kg,有机硒所占总硒的质量百分比为98.05%。均达到了国家标准。通过检测对DPPH和O-2的去除能力,表明了硒多糖和硒蛋白拥有良好的抗氧化作用。
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