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前言糖尿病肾病是糖尿病最为严重的慢性并发症之一,是终末期肾病最主要的原因,因此,糖尿病治疗方略的发展是一个紧迫的问题,然而,至今还没有一个清晰有效的方案被确立。许多因素与糖尿病的进展有关,包括高血糖、高血压、脂代谢紊乱、炎症刺激和氧化应激等。研究表明:糖尿病肾病与肾小球细胞外基质的积聚导致的肾小球硬化有关[1],而高血糖是通过作用于细胞内信号传导改变细胞的稳定表型,促进肾小球系膜细胞增生,足突细胞凋亡和细胞外基质的增加[2]、[3],其中肾小球系膜细胞的增生和细胞外基质的积聚在糖尿病肾病的肾小球硬化中起关键作用。近期研究集中在高血糖的作用上,糖基化产物(Advancedglycosylation endproducts AGEs)已经被确定在糖尿病肾病中起重要作用。研究表明转化生长因子-β(transforming growth factorβTGF-β)和结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor CTGF)的诱导在糖尿病肾病的发生发展中起重要作用。TGF-β作为最主要的致纤维化生长因子在肾小球硬化和间质纤维化的作用已经被证实。CTGF作为其下游效应介质也是一种促纤维化生长因子,在糖尿病肾病中起关键作用。CTGF属于CCN家族,它在多种生理和病理过程(包括细胞增殖,移植,血管发生,细胞外基质合成,细胞附着,细胞再生和凋亡)中起作用[4]、[5]、[6]。基于CTGF促进细胞外基质表达的作用,本研究的目的是观察体外转染CTGF反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide ASODN)对高糖培养的人肾小球系膜细胞(human glomerular mesangial cells HGMC)细胞外基质(Extracellular matrix ECM)表达的影响。探討CTGF ASODN在早期治疗糖尿病肾病的意义。材料与方法1、材料肾小球系膜细胞4200购于美国sciencell公司,脂质体Lipofectamine2000购于美国Invitrogen生命技术有限公司,CTGF正义寡核苷酸(5’-ATG CTC GCC TCCGTC GCG-3’)及反义寡核苷酸(5’-CGC GAC GGA GGC GAG CTA)由上海生工生物工程技术服务有限公司合成,人纤维连接蛋白(Fibronectin FN)和层粘连蛋白(Laminin LN)酶联免疫吸附剂试盒购于上海森雄公司。2、方法体外培养HGMC,取5-8代用于实验。实验分成六组1、正常糖组(5mmol/l)2、高糖组(30mmol/l)3、正常糖+甘露醇(25mmol/l)组4、高糖+CTGF反义寡核苷酸组5、高糖+CTGF正义寡核苷酸组6、高糖+单纯脂质体组。采用脂质体法转染寡核苷酸,在不同时间(0时、18时、24时、48时、72时)收集各培养组培养液上清。用ELISA法检测培养液上清中的纤连蛋白(fibronectin FN)和层粘连蛋白(laminin LN)含量。结果1、高糖呈时间依赖促进体外培养的HGMC分泌FN和LN增加,而甘露醇无此作用;2、转染CTGF反义寡核苷酸可抑制高糖所致的FN和LN分泌增加。正义寡核苷酸和脂质体无此作用。结论高糖培养可促进HGMC细胞外基质FN和LN分泌增加,转染CTGF ASODN可抑制上述高糖的作用,提示CTGF ASODN可通过抑制HGMC的CTGF表达水平而抑制细胞外基质的合成与分泌,这可能成为防治糖尿病肾病(diabetic nephropathyDN)、特别是早期肾病的有效途径之一。