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乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染的结局是由病毒、肝细胞和宿主免疫系统相互作用决定的。HBV感染重症化导致的重型肝炎或肝衰竭在临床上病情危重、发展迅速、病死率很高,是我国传染病死亡的重要原因之一。重型乙型肝炎肝衰竭的发病机制尚未得到系统阐明。HBV基因突变是影响病毒生物学特性的基本因素之一,HBV突变有可能改变病毒的复制能力和致病性、改变抗原表位而影响免疫应答反应、产生抗病毒药物耐药性等,既有可能引起持续感染,又有可能造成严重的肝细胞损伤。HBV基因组有4个主要开放读码框架(Open Reading Frames,ORF):S基因(包括前S1、前S2和S区)、C基因(包括前C和C区)、P基因和X基因。此外,还包括多个与HBV复制转录相关的基因调控序列。国内外已有一些文献报道了HBV基因突变与慢性重型乙型肝炎(Chronic severe hepatitis B,CSHB;简称慢重肝)的关系,其中包括对HBV前C/基本核心启动子(Basal CorePromoter,BCP)突变的研究。研究表明前C/BCP区某些突变可以影响HBeAg的表达/分泌或增加病毒复制能力。有人认为分泌型HBeAg与HBcAg有共同的抗原表位,可以减缓细胞毒T淋巴细胞(CTL)对表达HBcAg的肝细胞的攻击,因而该区突变不利于免疫耐受,但与慢性肝炎的病情加重相关。然而以往对前C/BCP基因突变研究结果并不一致,对上述观点也有争议,这可能与分析的样本数较小以及方法学上的差异有关。本文旨在应用DNA序列测定法进行多位点突变检测,通过比对分析较大量慢重肝和慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB;简称慢乙肝)患者样本HBV在各个位点上的突变发生率,解析HBV前C/BCP区基因突变与慢性乙肝重症化的关系。目的本研究检测了87例慢重肝患者血清HBV前C/BCP区突变情况,并通过与196例慢乙肝样本的对比,分析探讨了HBV前C/BCP区核苷酸突变与乙肝重症化的关系。方法研究对象均为成年患者,收集87例慢重肝和196例慢乙肝患者血清,提取HBV DNA,采用经我们改进的巢式PCR技术,扩增HBV前C/BCP区基因,对PCR产物进行DNA测序,用NBI软件比对结果。根据文献报道,重点检测了G1896、A1762、G1764、T1753、G1862和G1899共6个影响HBeAg表达、分泌或HBV复制能力的位点突变,结果(1)6个位点突变全部为阴性者:慢重肝组有3例,占3.4%,慢乙肝组有55例,占28.1%,两组间有显著差异(P＜0.01)。(2)在检测出突变的患者中,6个位点上慢重肝组在每个位点突变频率上均较慢乙肝组高,其中5个位点上的突变检出率有统计学意义,分别为A1762(78.2%vs 56.6%,P＜0.01)、G1764(88.5%vs 61.2%,P＜0.01)、G1862(9.2%vs 2.0%,P＜0.05)、G1896(52.9%vs 34.2%,P＜0.01)、G1899(25.3%vs 7.1%,P＜0.01)。(3)此外,插入/缺失突变形式在慢重肝组的检出率显著高于慢乙肝组(10.3%vs1.0%,P＜0.01)。(4)多联核苷酸替换突变计算也显示慢重肝组的检出率显著高于慢乙肝组:三联或三联以上核苷酸替换的检出率分别为56.3%和35.2%(P＜0.01),四联或四联以上核苷酸替换的检出率分别为25.3%和8.7%(P＜0.01)。结论HBV前C/BCP区基因突变发生频率的增加与慢性乙肝发生重症化相关,慢乙肝患者在发生HBV前C/BCP区基因突变后有可能导致病情加重或重型肝炎发生,但两者之间的因果关系需要进一步研究证实,结合临床资料分析突变的意义将有助于认识慢性乙肝重症化的发生机制。