不同佐剂对旋毛虫Ts87重组蛋白诱导小鼠免疫保护作用的影响及其机制的探讨

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旋毛虫病是世界范围内普遍存在的一种严重的人畜共患寄生虫病。此病临床表现较复杂,诊断较为困难,因此,研制有效的旋毛虫病疫苗是防治该病的重要途径,但目前仍没有有效的疫苗问世。 本室通过用免疫血清筛选旋毛虫成虫cDNA文库得到Ts87基因,并成功的进行了Ts87重组蛋白(rTs87)的原核表达。前期研究已证明rTs87具有很好的免疫原性和免疫保护性,是一个很有前景的候选疫苗分子。为进一步研究rTs87的保护性,并探讨其作为疫苗应用于人类及动物的可行性,本实验选择了两种已经应用于临床试验的佐剂QuilA和IsA720,与rTs87免疫小鼠,研究其诱导产生的免疫反应以及免疫保护作用,并以传统弗氏佐剂(弗氏完全佐剂(FCA)联合弗氏不完全佐剂(FIA))和氢氧化铝佐剂作参照,并初步探讨其免疫保护性产生的机制。 本实验将原核表达的rTs87亲和纯化后,与上述各种佐剂免疫小鼠,并设单纯rTs87免疫组和生理盐水组为对照,观察其产生的保护性。实验分为六组:弗氏佐剂+rTs87组、ISA720-rTs87组、OuilA+rTs87组、氢氧化铝+rTs87组、生理盐水+rTs87组和对照组。首先将rTs87与各种佐剂充分混合,背部皮下免疫雌性BALB/c小鼠,两周免疫一次,共免疫三次,末次免疫一周后每只小鼠用400条旋毛虫肌幼虫经口攻击感染。感染后45 d,断颈处死,取肌肉,用人工消化法收集全部肌幼虫,计数并计算减虫率。每次免疫前、攻虫感染前、攻虫感染后1、3、5W小鼠尾静脉取血,收集血清,ELISA检测血清中特异性抗体水平。结果显示弗氏佐剂、氢氧化铝、QuilA和ISA720分别与rTs87免疫小鼠后,获得了较好的保护性,减虫率分别为31.2﹪、39.1﹪、46.9﹪和50.3﹪,生理盐水+rTs87组也获得了16.8﹪的减虫率。血清ELISA检测结果显示,末次免疫后,各佐剂免疫组均引起较强的特异性rTs87抗体IgG反应,其中以佐剂QuilA和IsA720引起的抗体滴度最高。而且与生理盐水+rTs87组比较,各佐剂免疫组小鼠血清中抗体维持时间长,在攻击感染后5W抗体滴度仍在较高水平。上述结果表明,本次实验选用的佐剂均能够明显增强机体对rTs87的免疫反应,提高小鼠抗旋毛虫感染的保护性,其中佐剂QuilA和ISA720的效果最好。为了探讨不同佐剂与rTs87重组蛋白免疫小鼠获得的免疫保护性机制,末次免疫后3 d,每组取5只小鼠取脾细胞,放于96孔板中,37℃ 5﹪CO<,2>孵箱培养48 h后,ELISA法观察脾细胞细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4以及IL-10的分泌情况。结果显示:QuilA+rTs87组和ISA720+rTs87组小鼠Th1细胞因子IL-2、IFN-γ和Th2细胞因子IL-10明显升高。同时ELISA检测小鼠血清中抗体亚型IgG1和IgG2a的水平,结果显示:QuilA+rTs87组和ISA720+rTs87组抗体IgG1和IgG2a的水平明显升高,能够诱导机体产生Th1/Th2混合型的免疫反应。进一步采用流式细胞术检测小鼠免疫后lW以及感染旋毛虫后1W,2W,3W和5W的T淋巴细胞亚群动态变化,CD4<+>/CD8<+>计数结果显示,上述各种佐剂与Ts87重组蛋白配伍免疫后小鼠没有发生明显的免疫抑制。 本实验研究了几种不同佐剂诱导的免疫反应,并初步探讨了免疫保护性产生的机制,结果显示,QuilA和ISA720安全性好,能够显著增强机体的免疫反应,提高小鼠抗旋毛虫感染的抵抗力,可以作为重组蛋白疫苗的良好佐剂进一步深入研究,为进一步研制旋毛虫病的疫苗奠定了一定的基础。
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