水果抗自由基氧化能力的顺序注射化学发光联用测定技术研究

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近年来,人们越来越关注从生理学到食品科学的不同领域中抗氧化剂的作用和重要性,检测清除自由基能力是评价样品抗氧化能力是一种良好方法。自由基氧化及其产生的中间产物严重伤害生物膜、酶、维生素、蛋白质及活细胞功能,现已明确许多疾病,都与自由基有关。其中一些自由基还是公认的致癌物,因此,建立简便、快速、灵敏、可靠的具有高选择性的分析方法评估抗氧化能力对人类的健康有着重要的现实意义。化学发光分析方法具有检出限低、灵敏度高、线性范围宽、分析速度快、仪器设备简单等诸多优点。在无机物、生物活性物质、有机物的痕量和超痕量分析领域都得到广泛应用。顺序注射分析作为流动分析的一个分支或者第二代流动注射分析具有自动化程度高、试剂消耗少和重现性好等优点,已成为流动注射分析中最活跃的领域之一。将顺序注射进样与化学发光技术联用,不仅可以保留化学发光检测固有的优点,克服通常化学发光中存在的因反应速度过快致使反应过程难以控制以及重现性较差的弊端,同时还可以改善化学发光方法的分析性能,提高分析结果的准确度、重现性以及分析速度。本文将顺序注射进样与化学发光检测技术联用,用于水果样品中抗坏血酸清除超氧阴离子自由基和羟自由基的能力的分析,取得了比较满意的结果。论文的第一章介绍了超氧阴离子自由基、羟自由基的性质、产生方法,对包括荧光分析法、化学发光法、分光光度法、电化学方法、高效液相色谱法、电子自旋捕集技术等自由基的分析方法的最新进展进行了较为详细的介绍。同时,也阐述了顺序注射分析技术的特点,并对快速筛选抗氧化能力的流动注射分析方法进行了详细的叙述,其中包括清除ABTS·、DPPH·和电化学方法。论文的第二章将顺序注射与化学发光检测联用,建立了水果样品中清除超氧阴离子自由基的测定方法。其原理是在碱性条件下,邻苯三酚自氧化产生超氧阴离子自由基O2-,与鲁米诺发生反应,依据抗坏血酸浓度与超氧阴离子抑制率间的线性响应关系,实现了水果样品中抗坏血酸清除超氧阴离子自由基能力的测定。该方法的线性范围为5.0×10-5-6.0×104 mol/L,线性相关系数为0.9935,对物质的量浓度为5.0×10-4 mol/L的抗坏血酸进行11次连续测定的相对标准偏差(RSD)为0.95%,分析频率为200试样/小时,检出限为3.03×10-5mol/L,回收率为96.5%-114.0%。三种水果对超氧阴离子自由基的抑制率为猕猴桃>番茄>苹果。论文的第三章将顺序注射和化学发光检测联用,建立了抗坏血酸抗羟自由基氧化能力的测定方法。抗坏血酸在2.0×10-4-3.0×10-3mo/L范围内与抑制率呈线性响应关系,相关系数为0.9993,方法的相对标准偏差(RSD)为0.66%(n=11),检出限为9.7×10-5mol/L,回收率为84.6%-106.3%。将该法用于三种水果对羟自由基抑制率的测定,取得了良好的效果。论文的第四章对顺序注射和化学发光联用技术的实验内容进行了简单的总结。
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