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第一章背根神经节proBDNF在大鼠后足切割后的表达及作用目的：观察大鼠后足切割后proBDNF表达变化及对切割疼痛的影响。方法：采用纵行切割SD大鼠后足作为疼痛模型,运用免疫荧光双标记方法,观察大鼠后足切割后不同时间点(1-72hr) proBDNF在相应节段背根神经节的表达变化。腹腔注射proBDNF抗体中和内源性proBDNF后,以Von Frey尼龙纤维刺激后足行机械痛敏评价。结果：大鼠后足切割后1-24hr内,proBDNF在切割同侧背根神经节表达上调,proBNDF免疫阳性细胞百分比在切割后1-24hr内也明显增加。腹腔内给予proBDNF抗体明显增加大鼠后足切割后的缩足阈值。结论：大鼠后足切割后背根神经节proBDNF表达上调,proBDNF参与了大鼠后足切割后机械痛敏的过程。第二章proBDNF腺病毒载体的构建及鉴定目的：构建腺病毒介导的proBDNF基因用于活体组织的研究。方法：从提供的模板中利用PCR方法钓取目的基因,而后将目的载体进行酶切,产物电泳回收后进行交换,再把交换产物转化至细菌感受态细胞。然后对长出的克隆先进行菌落PCR鉴定,再进行测序和比对分析。测序正确后,采用Lipofectamine2000转染293T细胞24小时后,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达变化。从菌落中收集生长状态良好的目的细胞,提取蛋白,采用Western Blot的方法检测目的基因的表达情况。采用AdMax腺病毒包装系统包括腺病毒穿梭质粒和辅助包装质粒(pBHG lox Δ E1,3Cre)共同转染HEK293细胞,再对pDC315-proBDNF病毒扩增、提纯和Western Blot检测。结果：所构建的pDC315-proBDNF重组腺病毒经酶切、PCR和Western Blot鉴定成功的转化了proBDNF,基因片段大小为741bp。原代病毒滴度为8.0×109PFU/mL, proBDNF在HEK293细胞得到有效表达。结论：成功的构建了proBDNF腺病毒载体第三章proBDNF腺病毒载体足底注射后对痛阈的影响目的：通过大鼠足底注射proBDNF腺病毒载体,研究proBDNF过表达对痛阈的影响和组织形态学的改变。方法：16只大鼠随机分为两组：空白腺病毒载体组(n=8)和proBDNF腺病毒载体组(n=8),分别于足底注射空白腺病毒载体和proBDNF腺病毒载体(109pfu)。在注射前和注射后3天检测大鼠后足机械刺激缩足阈值的变化；注射后三天在足底注射部位取相同大小的组织进行Western blot、荧光显微镜检、免疫荧光染色、免疫组化实验和H&E染色。结果：1)proBDNF腺病毒载体注射后,proBDNF腺病毒载体在体内良好表达,大量的病毒表达在神经纤维上。2)proBDNF病毒载体注射后,注射部位明显肿胀,显微镜检可见大量炎性细胞浸润于皮下组织。3)注射后3天,与空白腺病毒载体相比proBDNF腺病毒载体注射后大鼠后足机械刺激缩足阈值明显降低。结论：大鼠后足注射proBDNF腺病毒载体后,proBDNF腺病毒载体在神经纤维上大量表达；过表达的proBDNF导致大鼠后足机械刺激缩足阈值明显降低和足底组织的炎症反应。因而proBDNF促进疼痛的过敏且伴随炎性反应意味着proBDNF可能是外科疼痛治疗的新靶点。