丹参提取物SalB在自然流产小鼠模型中的免疫调节作用

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目的:丹参提取物Sal B在CBA/J(H-2k)×DBA/2(H-2d)自然流产小鼠模型中的免疫调节作用。方法:本实验方案设计三个小组:第一个小组是正常妊娠模型小组CBA/J×CBA/J,第二个小组是CBA/J×DBA/2J模型基础上的Sal B100 mg/kg治疗小组,第三个小组是自然流产模型小组CBA/J×DBA/2J。Sal B治疗组的CBA/J雌鼠于妊娠第0.5天每日灌胃Sal B100 mg/kg的剂量,正常妊娠模型组与自然流产模型组于妊娠第0.5天每日灌胃Distilled Water 0.5 ml,三组CBA/J雌鼠于妊娠第12.5天观察各组流产率,并分别取CBA/J雌鼠的子宫、蜕膜、胎盘及脾脏组织用于检测。取12.5天自然流产模型组中流产胚胎与非流产胚胎的胎盘、子宫、蜕膜用于检测。结果:自然流产小鼠模型研究:(1)流产胎盘与非流产胎盘的基因表达差异:在自然流产小鼠模型中,通过RT-PCR分析妊娠12.5天的CBA/J雌鼠在同一子宫中流产胎盘与非流产胎盘中的基因表达差异,发现在流产胎盘组织中促炎症因子TNF-α、IL-1β及PD-L1相比较于非流产胎盘组织,其表达显著升高(P<0.05;P<0.05;P<0.01);TLR-2、TLR-4在流产胎盘组织中的表达显著升高(P<0.05;P<0.01)。(2)流产胚胎的子宫组织与非流产胚胎的子宫组织基因表达差异:在自然流产小鼠模型中,通过RT-PCR分析妊娠第12.5天CBA/J雌鼠在同一子宫中流产胚胎的子宫组织与非流产胚胎的子宫组织基因表达情况,结果发现各目的基因在两者之间表达无明显差异(P>0.05)。(3)流产胚胎蜕膜与非流产胚胎蜕膜基因表达差异:在自然流产小鼠模型中,通过RT-PCR分析妊娠第12.5天的CBA/J雌鼠在同一子宫中流产胚胎蜕膜与非流产胚胎蜕膜中的基因表达情况,结果显示TLR-4的表达在流产胚胎的蜕膜组织中显著升高且有统计学意义(P<0.05),其他相关细胞因子如促炎症因子的表达在流产胚胎的蜕膜中表达有升高趋势。药物Sal B作用研究:(1)流产率观察:观察正常妊娠模型组、自然流产模型组、Sal B治疗组的流产率,结果显示Sal B可以显著降低模型对照组流产率(P<0.0001)。(2)HE染色对三组胎盘形态进行病理形态学分析:结果显示在Sal B治疗组中,迷路区/胎盘的比例大于自然流产模型组的比例(P<0.05),因此说明Sal B可以增加胎盘组织中的迷路面积。(3)RT-PCR技术分析三组妊娠12.5天胎盘组织中目的基因表达情况:结果发现在Sal B治疗组中,相比较于自然流产模型组,Sal B治疗组胎盘组织中CCL-2(P<0.05)、CCL-3(P<0.01)、CXCL-10(P<0.05)及TNF-α(P<0.05)、NF-кB(P<0.05)、IFN-γ(P<0.05)表达均显著降低。Sal B可以显著降低自然流产模型组中胎盘组织的TLR表达,相比较于自然流产模型组,正常妊娠模型组和Sal B治疗组表达均显著降低:TLR-2(P<0.01)、TLR-4(P<0.0001)、TLR-7(P<0.05)。(4)RT-PCR技术检测三组妊娠12.5天CBA/J雌鼠的蜕膜、子宫、脾脏组织中相关基因表达情况:结果显示三组各相关的目的基因表达无明显差异(P>0.05)。(5)Sal B显著降低胎盘组织中Nkp46及CTL的表达及分布:结果显示Sal B治疗组与自然流产模型组相比较,Sal B治疗组中的胎盘组织NK细胞毒性表达受体Nkp46及细胞毒性CD8+T细胞表达均显著降低(P<0.05)。我们检测三组脾脏中各淋巴细胞表达及分布,结果显示三组表达无明显差异(P>0.05)。结论:(1)在自然流产模型组中同一子宫内的流产胎盘与非流产胎盘的TNF-α、IL-1β,PD-L1及TLR-2、TLR-4表达显著升高,这可能与该模型流产的病因相关。(2)Sal B可以降低自然流产小鼠模型的流产率,改善妊娠结局。(3)Sal B可以显著减低自然流产小鼠模型胎盘组织中多种促炎症因子表达及抑制TLR-NF-κB-TNF-α通路来改善炎症环境。(4)流式细胞技术检测Sal B通过降低自然流产模型组的胎盘组织中Nkp46、CTL及相关细胞因子的表达来调节免疫耐受,降低流产率。
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