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肺炎支原体(Mycoplasma Pneumoniae,MP)是引起人类非典型肺炎和多种呼吸道感染的病原体之一,人感染后还会引起心肌损害、神经系统损害、肾脏损害、传染性单核细胞增多症、川崎病等并发症。肺炎支原体对青霉素类药物不敏感,只对大环内酯类、四环素类药物敏感。因此,尽早检测出肺炎支原体感染,对有效治疗由其引发的疾病具有重要意义。肺炎支原体能感染人关键是其可以黏附人的呼吸道上皮细胞,而黏附蛋白P1是肺炎支原体的主要黏附蛋白,也是肺炎支原体的主要免疫原,在P1羧基末端含有多个抗原决定簇。本研究以肺炎支原体FH株基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增获得黏附蛋白P1基因羧基末端部分编码序列,再将其克隆到克隆载体pEASY-T1上,进而得到了pEASY-MP-P1F这一重组质粒。后续实验对pEASY-MP-P1F进行基因测序检查,把测序结果正确的P1F基因克隆到表达载体pET32a(+)上,构建pET32a-MP-P1FE这一重组表达质粒。接着对pET32a-MP-P1FE中的P1FE进行测序,检测正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达,以Ni2+亲和层析柱对pET32a-MP-P1FE表达的重组蛋白进行纯化,SDS-PAGE显示纯化的重组蛋白相对分子质量为50kDa至60kDa,与预计值55.9kDa一致。Western Blotting、ELISA免疫检测证实,重组蛋白与感染肺炎支原体病人血清中的抗体有特异性反应。因此,此次研究成功克隆表达了具有免疫原性的黏附蛋白P1羧基末端基因,为进一步研究开发肺炎支原体诊断试剂和疫苗等奠定了良好的基础。