【摘 要】
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该文在Bac-to-Bac系统中,以重组转移载体pFastBac-hGH为模板,用反向PCR法缺失原多角体基因起始密码子到多克隆位点之间的序列,转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac后发
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该文在Bac-to-Bac系统中,以重组转移载体pFastBac-hGH为模板,用反向PCR法缺失原多角体基因起始密码子到多克隆位点之间的序列,转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac后发生转座,得到含hGH cDNA的重组穿梭载体rBacmid-hGH-S2.又利用PCR定点诱变方法在pFastBac-hGH中引入酶切位点.通过酶切反应去除了原多角体基因起始密码子到hGH基因cDNA起始密码子ATG之间的序列,并改变了-3位的碱基(A->C),同样转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac后发生转座,得到含hGH cDNA的重组穿梭载体rBacmid-hGH-S3.再将这两种重组穿梭载体分别转染贴壁培养的昆虫细胞Sf9,得到含不同hGH基因5-UTR序列的重组病毒rAcV-Bac-hGH-S2,rAcV-Bac-hGH-S3.
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