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黄体是雌性哺乳动物卵巢中的暂时性分泌组织,由卵泡排卵后的泡膜细胞和颗粒细胞分化形成,其重要功能是分泌孕酮。黄体维持与退化与发情周期、生殖道发育以及妊娠维持和分娩密切相关。已经清楚,黄体退化主要是在前列腺素F2α（PGF2α）的作用下完成的,细胞凋亡的调控伴随着黄体的维持和退化进程。内质网作为合成和加工蛋白质、胆固醇的场所,是细胞重要的细胞器,内质网的稳态对于黄体的孕酮合成分泌功能十分重要,超负荷的蛋白堆积及Ca2+的失衡导致的内质网内环境紊乱被称为内质网应激（ER stress）,内质网应激诱发未折叠蛋白反应（UPR）,通过降低蛋白合成、促进蛋白的折叠、运输缓解内质网应激,使内质网重新恢复稳态,但当UPR不足以恢复内质网稳态时,则会启动细胞的凋亡。有研究证明,UPR还参与了自噬的调节,自噬也是影响细胞生存的因素之一。研究发现,在大鼠和牛退化时期的黄体中发生内质网应激,但未折叠蛋白反应信号通路的活化方式并不相同,提示未折叠蛋白反应参与调控黄体的退化,但在不同物种中的调控方式不同,且未折叠蛋白反应对黄体退化的调控机制尚不明确。另外,未折叠蛋白反应是否通过影响自噬从而参与黄体的退化也有待进一步的研究。本研究以山羊为研究对象,收集不同时期的山羊黄体,通过免疫组织化学、定量PCR、蛋白质印迹等方法检测山羊不同时期黄体中未折叠蛋白反应、自噬、凋亡相关蛋白的表达水平;以永生化山羊黄体细胞为模型,利用PGF2α体外诱导黄体细胞凋亡模拟黄体的退化过程,通过RNA干扰、流式细胞术、蛋白质印迹、免疫荧光等方法,研究内质网应激和自噬在调控山羊黄体细胞凋亡过程中的作用和机制。主要的试验结果如下:（1）内质网应激诱发的未折叠反应参与山羊黄体的维持和退化过程。内质网应激标志蛋白GRP78主要定位于山羊卵巢的黄体,在山羊晚期黄体,未折叠蛋白反应相关蛋白GRP78、EIF2S1、ATF4的表达显著上调,IRE1、EIF2S1的磷酸化水平和ATF6的剪切水平显著上调,说明三条经典的未折叠蛋白反应信号通路均被激活;自噬相关蛋白LC3-II的表达显著上调,P62的表达显著下调,显示山羊晚期黄体中自噬水平上调;促凋亡因子Caspase3的剪切水平上调,说明山羊晚期黄体中存在黄体细胞的凋亡。（2）用1μM的PGF2α处理黄体细胞,建立黄体细胞凋亡模型。证明PGF2α刺激下,未折叠蛋白反应相关蛋白GRP78、EIF2S1、ATF4的表达显著上调,IRE1、EIF2S1的磷酸化水平和ATF6的剪切水平显著上调,未折叠蛋白反应信号通路的活化规律与晚期黄体中一致,自噬相关蛋白LC3-II的表达显著上调,P62的表达显著下调,抗凋亡因子Bcl-2的表达下调,促凋亡因子Bax的表达上调,Caspase3的剪切水平上调,说明PGF2α刺激下,黄体细胞发生内质网应激、自噬和线粒体途径的凋亡。（3）以内质网应激诱导剂Tm处理黄体细胞,引起与PGF2α处理黄体细胞相同水平的内质网应激,Bax的表达显著上调,Bcl-2的表达显著下调,山羊黄体细胞凋亡率显著上调;而内质网应激抑制剂4-PBA可抑制Tm或PGF2α引起的Bcl-2表达上调和Caspase3、Caspase9的剪切水平下调,山羊黄体细胞的凋亡率显著降低,同时,LC3-II的表达显著下调,说明抑制内质网应激降低了山羊黄体细胞的自噬水平;自噬抑制剂CQ抑制PGF2α引起的黄体细胞自噬后,黄体细胞的凋亡率显著升高,未折叠蛋白反应相关蛋白的表达不受影响。（4）转染si IRE1下调了山羊黄体细胞IRE1的表达和IRE1的磷酸化水平,PGF2α诱导的黄体细胞凋亡率下调,Bcl-2的表达显著高于转染si NC组;转染si ATF6下调了山羊黄体细胞ATF6的表达,但其对PGF2α诱导的黄体细胞凋亡无显著影响;sh EIF2S1慢病毒感染山羊黄体细胞下调了EIF2S1的表达和EIF2S1的磷酸化水平,PGF2α诱导的黄体细胞凋亡率显著上调,LC3-II的表达显著下调,自噬水平降低。综上所述,本研究证明内质网应激在调控PGF2α诱导的山羊黄体退化中具有重要作用,活化的IRE1信号通路通过抑制Bcl-2的表达激活线粒体途径的黄体细胞凋亡,活化的PERK信号通路通过激活自噬阻碍山羊黄体细胞的凋亡。以上结果为进一步揭示山羊黄体退化的调控机制提供了新的理论数据。