论文部分内容阅读
肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)是致病性大肠杆菌中的一种,由于其繁殖速度快和具有侵袭性而受到人们的广泛关注。目前EIEC引发疫病的治疗方法主要是抗生素治疗,但此法易引起肠道菌群失调、二重感染、抗生素残留等问题。采用菌株间的拮抗作用来治疗疾病是目前避免抗生素滥用的一个新的发展方向。因此,本研究从中国传统食品中筛选具有拮抗EIEC作用的菌株,考察它们对EIEC粘附和侵袭结肠癌上皮细胞系HT-29的抑制作用,并研究这些菌株的益生菌特性。本研究以MRS, M17和TPY培养基作为基本培养基,从发酵面团、泡菜、腌肉、婴儿粪便和传统发酵乳制品等来源中分离出来187株乳酸菌,通过牛津杯琼脂扩散实验,初步筛选出24株对肠侵袭性大肠杆菌具有明显抑制作用的乳酸菌。实验对初筛的24株乳酸菌进行抑菌物质分析,取乳酸菌细胞发酵上清液经过胰蛋白酶、蛋白酶K、过氧化氢酶、加热和调整pH为中性处理后,测其抑菌圈大小,通过与未处理的菌液所产生的抑菌圈大小的比较后发现,在经过蛋白酶和热处理作用后,菌株的抑菌效果有部分降低,但当pH调为中性处理后,发酵上清液失去了对EIEC的拮抗活性。实验考察这24株乳酸菌的益生菌特性。首先测量它们对结肠癌上皮细胞HT-29的粘附特性,然后对粘附特性较好的乳酸菌进行低酸和高胆盐耐受性分析,最后筛到两株具有优良益生菌特性的潜在益生菌:植物乳杆菌CCFM233和CCFM231。它们对EIEC的上清液抑菌圈大小分别是:15.50±0.28mm和15.00±0.40mm;对乳杆菌CCFM233和CCFM231的发酵上清液的抑菌物质进行分析发现:它们的上清液中含有蛋白类抑菌物质,发酵上清液在酸性条件下才能保持最大的抑菌活性。这两株植物乳杆菌对HT-29细胞具有非常好的粘附特性,粘附率分别是:45±6个菌/cell和29±2个菌/cell;在pH为2的条件下培养1h,两株菌的残存活菌数分别是:2.5×106CFU ml-1和1.6×107CFU ml-1;在2‰胆汁条件下培养16h,它们的生长的数目都超过了3.2×105CFU ml-1。体外细胞实验研究表明:植物乳杆菌CCFM233和CCFM231能够强烈的抑制EIEC对HT-29细胞的粘附和侵袭。用植物乳杆菌CCFM233和CCFM231干预后,能分别降低EIEC对HT-29细胞的粘附率达66%和50%;分别降低EIEC对HT-29细胞的侵袭率达31.2%和34.7%。研究这两株乳杆菌对益生元的利用能力,实验结果表明:植物乳杆菌CCFM233和CCFM231对低聚半乳糖、低聚果糖、低聚木糖和低聚麦芽糖等益生元具有较好的利用能力。本研究最终筛到两株具有拮抗EIEC作用的乳杆菌,这两株菌对肠道上皮细胞具有较高的粘附能力,具有较好的耐酸耐胆盐特性和抑制EIEC粘附和侵袭肠上皮细胞的能力,是两株潜在的益生菌。