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背景:研究表明乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)第四个阅读框架所编码的蛋白HBx调控着HBV的复制,HBx作为“多功能病毒蛋白”介导的Calcium- PyK2 (calcium-dependent proline-rich tyrosine kinase-2)信号通路是目前明确可影响HBV复制的环节之一,胞内钙通道及钙离子信号可能直接参与了HBV病毒的复制过程,体内外实验证实HBx可与线粒体膜上的钙通道通透性转运孔(Mitochondrial permeability transition pore,MPTP)结合,但其是否影响MPTP的功能及其与病毒复制的相关性有待进一步研究,HBx Knockdown引起HBV复制功能的减低具体机制亦尚不明确。目的:本研究拟通过HBx siRNA下调HBx mRNA表达以期抑制HBV DNA的复制,同时分析线粒体钙通道转运孔与病毒复制的关系;建立HBx Knockdown前后的基因表达谱,为后续的深入相关基因功能和调控机制研究奠定基础。方法:本研究通过合成HBx基因1694起始位点siRNA,转染含HBV全基因组的HepG2.2.15细胞,运用微粒子酶免疫分析技术(MEIA)对HBV表面抗原(HBsAg).e抗原(HBeAg)进行定量检测,Real-time PCR分析HBxmRNA及HBV DNA拷贝数的变化。运用流式细胞仪定量分析胞内线粒体MPTP状态变化引发Calcein激发的荧光强度变化,利用Affymetrix表达谱芯片筛选HBx Knockdown前后的差异表达基因,对部分基因用Real-time PCR进行验证。结果:HBx siRNA1694可明显下调HepG2.2.15细胞HBx mRNA的表达,抑制培养上清HBsAg和HBeAg的表达分泌,减低培养上清HBV DNA拷贝数;HBxsiRNA1694和MPTP抑制剂环孢素A(CsA,Cyclosporine A)可拮抗胞内钙离子释放剂A23187引发的Calcein荧光强度的降低HBx Knockdown前后表达谱芯片结果显示差异2倍(P<0.05)以上的基因有385个,其中在HBx siRNA1694处理后明显下调的有288个基因,97个基因明显上调表达,并对HSPB8、PIK3CB等相关基因进行了验证。结论:HBV X基因1694起始位点siRNA通过下调HBx mRNA的转录可有效抑制HBV复制过程,该HBV病毒复制抑制效应与HBx siRNA (?)抑制线粒体膜通透转运孔的功能密切相关;建立了HBx Knockdown前后表达谱,Real-time PCR对相关基因验证的结果表明,表达谱芯片具有较好的重复性和可靠性,为后期相关基因功能和HBV分子调控机制的深入研究奠定基础。