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干扰素-γ(Interferon-gamma,IFN-γ)是一种具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子,主要由活化的T细胞和NK细胞产生。IFN-γ对机体免疫系统具有强大的调节作用,是机体发挥免疫功能、清除体内病原体不可缺少的成分,因此,IFN-γ在疾病的诊断、治疗和疫苗免疫效果检测等方面起着重大作用,是现代分子生物学、免疫学和临床医学研究的热点之一。本研究依照猪IFN-γ(pIFN-γ)基因序列,去除信号肽后设计引物,PCR扩增该基因并克隆至原核表达载体pET-30a ,构建pET-30a-pIFN-γ重组表达载体,经PCR、双酶切、测序鉴定正确后,转化入寄主菌BL21 (DE3),用IPTG进行重组pIFN-γ诱导表达,并对该表达系统的表达条件进行优化,结果表明:重组pIFN-γ得到正确的诱导表达,表达的最佳条件为在LB培养基中28℃诱导8 h,诱导剂浓度为0.1 mmol/L。此外还发现,无论在何种条件下进行诱导表达,包涵体形式的重组蛋白较可溶性形式的量多,降低诱导表达温度可使可溶性形式的重组蛋白量增加。可溶性的表达产物用镍亲和层析柱纯化,再用Sephadex-G100做进一步纯化;而包涵体产物经DOC洗涤、SKL变性溶解、透析复性进行纯化。纯化后的表达产物经SDS-PAGE、Western blot分析证实得到了高纯度的重组pIFN-γ。对纯化的重组pIFN-γ进行了一系列生物活性的研究:(1)用细胞病变抑制法对纯化的重组猪IFN-γ进行抗病毒活性测定,结果表明纯化的重组猪IFN-γ蛋白具有较高的干扰病毒复制活性,在PK15细胞系上其对伪狂犬病毒(PRV)的抑制活性为2.0×103 U·mg-1,对标准O型口蹄疫病毒抑制活性为2.56×105 U·mg-1;(2)用纯化的重组猪IFN-γ对培养的传代细胞PK15进行诱导,结果显示pIFN-γ在高浓度时可诱导PK15细胞发生凋亡;(3)在体外以不同剂量的重组猪干扰素-γ刺激PK15细胞和猪腹腔巨噬细胞,再用弓形虫进行攻击感染,结果随着猪干扰素-γ的剂量的增大,巨噬细胞抗虫作用增强,而不同浓度的重组猪干扰素-γ对侵入PK15细胞内的弓形虫均无明显影响。本研究为猪IFN-γ相关的基因工程生物制品的开发奠定了基础。