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苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)是一种革兰氏阳性产孢细菌，能形成杀虫晶体蛋白、外毒素、几丁质酶、营养期杀虫蛋白和蛋白酶等多种毒素，对多种昆虫以及线虫、螨类和原生动物都有活性。其中免疫抑制因子A(Immune Inhibitor A，简称为InhA)是一种含锌金属蛋白酶，能特异性地水解宿主昆虫产生的抗菌肽，因而对某些昆虫的体液免疫系统具有高抗性。到目前为止，对于InhA主要功能的研究仍未获得任何确切性的结论。为了进一步加深对inhA基因及其编码蛋白的认识，我们从Bt 8010中克隆了该基因，并对推导的InhA蛋白做了一系列的序列分析。同时我们也将该基因在大肠杆菌中表达，并对表达产物的杀虫活性做了检测。Bt 8010中克隆得到的inhA基因(命名为inhA-8010)全长2391 bp，编码796 Aa的蛋白，该蛋白分子量和等电点通过软件预测分别为86.5 kDa和5.22。inhA-8010已在GenBank上登录，登录号为AY945956。在线BLAST软件分析表明推导的InhA-8010与蜡质芽孢杆菌属各成员的InhA蛋白具有很高的氨基酸序列同源性。信号肽分析说明InhA-8010的成熟加工剪切位点在第31-32的Ala-Glu之间，说明InhA是一种跨膜蛋白。用在线Conserved Domain Search工具进行保守功能区分析，推导出InhA-8010蛋白质一级结构功能域主要包含有：肽酶M6(peptidase_M6，649Aa)和细菌中未知功能的蛋白(760Aa)。将InhA-8010与Bt 407的InhA进行比较，可以发现它们的氨基酸组成中都不含半胱氨酸，并且氨基酸序列中都包含锌结合基序(HEXXH)，后者是含锌金属蛋白酶家族成员所共有的特点。此外，通过将inhA-8010与pGEX-4T-3表达载体连接，构建了重组表达载体pGEXinhA，并成功转入大肠杆菌E．coli BL21(DE3)。阳性克隆子通过PCR和核酸测序得以验证。inhA-8010在tac启动子调控下经IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析说明表达的融合蛋白(包含26 kDa GST)为110 kDa左右，与ExPASy软件预测的基本一致。生物测定表明表达产物对3龄小菜蛾幼虫具有杀虫活性，并且对其生长也表现出较明显的抑制作用。蛋白可溶性试验说明该表达产物部分可溶。