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骨质疏松对许多疾病的发生影响巨大并已达到流行比例,我国尤为严重。现有的治疗药物虽然有效,但使用风险很大,因此安全、有效、无毒副作用、可长期使用的骨质疏松防治药物的研制具有尤为迫切的现实意义。研究表明,肽螯合钙是安全有效的骨质疏松防治药物和补钙制剂。我国是禽畜饲养大国,畜骨资源丰富,但缺乏深度开发利用。本研究以新鲜羊骨为原料,酶法制备羊骨胶原肽,并将其与钙源螯合,制备肽钙螯合物。通过单因素试验确定碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、复合蛋白酶和木瓜蛋白酶的水解条件；以水解度为指标,筛选出水解效果最好三种酶依次是碱性蛋白酶(A)、复合蛋白酶(B)和风味蛋白酶(C)。上述7种酶单酶水解过程中,反应各种酶水解程度的4个指标即：水解度、多肽生成量、短肽得率以及氨基态氮之间呈极显著正相关。采用Box-Behnken中心组合设计和响应面分析法,优化A、B、C 3种酶的水解工艺。结果表明碱性蛋白酶的最佳酶解条件为底物浓度9%(W/V)、水解温度45℃、水解时间325min、加酶量4.25%(E/S)、pH 9,水解度为28.12%。复合蛋白酶的最佳酶解条件为底物浓度9%(W/V)、水解温度为55℃、水解时间300min、加酶量5%(E/S)、pH7.5,水解度为28.54%。风味蛋白酶的最佳酶解条件为底物浓度12%(W/V)、水解温度55℃、水解时间315min、加酶量3.56%(E/S)、pH6,水解度为20.38%。结果表明优化后的水解度显著高于优化前。为使水解度进一步提高,将上述三种酶两两组合,进行双酶水解试验,以水解度为指标,确定每种组合(A+B, A+C, B+C)的水解度最大的水解工艺。结果表明A+B组合的同步水解的最大水解度为29.79%,优于顺序水解。A+C组合先A后C顺序水解水解度最大,为36.56%。B+C组合先B后C顺序水解可得最大水解度34.56%。由此可见,3种双酶组合均使水解度进一步显著提高。经优化的A+C组合先A后C的水解条件为：底物浓度为12%,水解温度为55℃,先加入碱性蛋白酶水解203min,后加入风味蛋白酶水解122min。按照水解度最大的工艺制备胶原多肽液并与氯化钙螯合,以螯合率为指标,考察温度、pH、时间、底物质量比对螯合率的影响,经响应面优化确定最佳螯合工艺：多肽液中蛋白质质量与氯化钙质量比为2：1、pH为8.66、温度为53℃、时间为50min,此条件下的螯合率可达70.4%。对所制备的多肽螯合钙进行茚三酮试验、傅里叶红外光谱以及电镜扫描分析,证实胶原多肽与钙离子之间发生了化学螯合反应,形成了羧酸盐和胺盐。