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目的:
S100蛋白家族是一类低分子量酸性钙离子结合蛋白,具有EF手相结构,可以在特定时空参与钙离子信号传导,调节多种细胞生物学活动,如细胞分化、细胞迁移、基因转录以及细胞周期运行等,S100A8、S100A9与S100A4均属于S100蛋白家族,其中S100A8和S100A9极易形成异二聚体复合物,研究表明,S100A8/A9表达失调与几种常见的人类恶性肿瘤相关。而S100A4蛋白在多种恶性肿瘤中的也有异常表达。但其与外阴疾病之间是否存在一定的关联尚不明确,因此,本研究将检测外阴硬化性台藓及外阴鳞癌中S100A8/A9及S100A4的表达情况,探讨其与外阴疾病之间的关联。
材料与方法:
一、材料
1、标本
选自中国医科大学附属第一医院病理研究室内1998-2011年经手术切除活检存档的蜡块,外阴鳞癌(VSCC)30例,外阴硬化性苔藓(VLS)20例,外阴正常皮肤10例。所有患者病理资料完整,标本均经病理学证实,均未经放化疗及激光等物理治疗。搜集外阴鳞癌患者的临床病理资料进行统计分析,包括:临床分期、病理分级。
2、试剂
鼠抗人S100A8/A9多克隆抗体(工作浓度1:50),鼠抗人S100A4多克隆抗体(工作浓度1:100)均购自美国SANTA公司,即用型SABC试剂盒,DAB显色剂购自北京博奥深生物工程有限公司。
二、实验方法
采用SABC免疫组织化学方法分别检测外阴正常组织、外阴硬化性台藓及外阴鳞癌中S100A8/A9及S100A4的表达情况。
三、免疫组化染色结果判定标准
在光学显微镜下观察以细胞浆或细胞核出现黄色或棕黄色颗粒者为阳性,利用显微图象分析系统MetaMorph(LYIC/OLUMPUS.US/JP)进行积分光密度测定,每张切片选取5个不同高倍视野,计算同一张切片的平均积分光密度值。
四、统计学方法
利用SPSS17.0统计分析软件,各组计量资料结果进行t检验,P<0.05有统计学意义。
实验结果:
1、S100A8/A9蛋白在外阴不同组织中的表达情况
S100A8/A9蛋白表达于细胞核及细胞浆,呈棕黄色颗粒,S100A8/A9在外阴正常皮肤阳性细胞多位于基底细胞层,阳性8例,阳性细胞的平均光密度值0.79461±2.094,在VLS中阳性细胞位于表皮近全层,阳性15例,VLS中表达阳性细胞的平均光密度值1.6206±1.287,两者有显著性差异(P<0.05),在VSCC中癌巢中阳性细胞呈高表达,阳性21例,S100A8/A9蛋白表达阳性细胞的平均光密度值2.5358±3.476,与正常相比有统计学差异(P<0.05)。
2、S100A4蛋白在外阴不同组织中的表达情况
S100A4蛋白表达于细胞核及细胞浆,呈棕黄色颗粒,S100A4在外阴正常皮肤阳性细胞多位于基底细胞层,阳性8例,间质呈少量阳性表达或阴性表达,阳性细胞的平均光密度值0.3020±1.672,在VLS中阳性细胞位于表皮全层,阳性14例,间质近阴性表达,VLS中表达阳性细胞的平均光密度值0.3583±1.497,两者无明显差异(P>0.05),在VSCC中癌巢中呈阴性表达或极少细胞阳性,阳性19例,间质细胞呈高表达,S100A4蛋白表达阳性细胞的平均光密度值0.5310±2.768,与正常相比有统计学差异(P<0.05)。
结论:
1、S100A8/A9参与外阴硬化性苔藓的病变过程。
2、S100A8/A9在外阴鳞状细胞癌中促进肿瘤细胞增殖的作用。
3、S100A4在外阴鳞状细胞癌间质中促进肿瘤细胞的侵袭和转移,但在外阴表皮细胞癌变过程中并未起作用。