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目的:(1)动物实验部分采用改良后小平台水环境睡眠剥夺法(MMPM)致动物失眠模型,观察不同时程睡眠剥夺条件下大鼠行为学变化及睡眠剥夺后大鼠海马内c-fos蛋白及神经生长因子(nerve growth factor,NGF)在不同时程的表达变化,探讨失眠的可能发生机制;(2)临床研究部分在辨证选方论治的基础上,观察将“助卫出营”和“养营纳卫”并重的思路治疗72例符合临床诊断依据的肝气郁结型失眠患者的疗效,评价将“助卫出营”和“养营纳卫”并重治疗肝气郁结型失眠患者的疗效,以期为临床治疗失眠提供有效的思路与方法。 方法:本论文从动物实验和临床研究进行阐述。(1)动物实验:将35只成年雄性大鼠随机分为正常对照组(CC)和模型组,模型组又分为睡眠剥夺12h组(SD12h)、睡眠剥夺24h组(SD24h)、睡眠剥夺48h组(SD48h)、睡眠剥夺72h组(SD72h)、睡眠剥夺96h组(SD96h)、睡眠剥夺24h大平台组(TC24h)。采用改良多平台水环境睡眠剥夺法(MMPM)建立大鼠的睡眠剥夺模型,完成相应的睡眠剥夺后,用免疫组织化学的技术分别测定不同时程大鼠海马中c-fos蛋白及NGF的表达量;用HE染色观察海马神经细胞形态随时间的变化;(2)临床研究:本研究选择临床上较常见的符合诊断依据的肝气郁结型失眠患者72例作为本研究对象,且设中药对照组和将“助卫出营”和“养营纳卫”并重的研究组。总疗程均为4周。对照组予柴胡疏肝散原方口服;研究组选择卯时(7:00)服用柴胡疏肝散加减合桂枝汤(桂枝:芍药=2:1),酉时(19:00)服用柴胡疏肝散加减合桂枝汤(桂枝:芍药=1:2);两组均在治疗前、治疗第2周后及治疗第4周结束时评定PSQI及中医症状评分量表,以分值的变化来对比、分析两组的疗效。 结果:动物实验:(1)不同时程模型组大鼠海马部位神经细胞分布减少,细胞排列疏松,染色质深,部分细胞分裂停止;正常对照组镜下可见神经元排列较紧密,胞质较均匀,结构较完整,海马神经细胞形态随时间变化不明显;(2)不同时程c-fos的阳性表达:不同时程CC组c-fos的阳性表达未见明显变化(P>0.05);SD12h组阳性细胞数增加,SD24h组阳性表达亦增多,SD48h组阳性表达达到高峰,SD72h组与SD96h组阳性表达略下降;SD12h组、SD24h组、SD48h组、SD72h组与CC组比较均增多,差异具有统计学意义(P<0.05);SD96h组、TC24h组与CC组比较,差异无显著统计学意义(P>0.05);(3)不同时程NGF的表达:与CC组比较,SD12h组阳性细胞数增加,差异具有统计学意义(P<0.05);SD24h组、SD48h组、SD72h组及SD96h组阳性细胞数均减少,与CC组相比较有显著性差异(P<0.05);TC24h组与CC组比较,差异无显著统计学意义(P>0.05)。临床研究:(1)疗效比较:研究组总有效率为88.89%,对照组总有效率为75.00%,差异有统计学意义(P<0.05);(2)两组治疗前后PSQI分值比较:治疗前两组患者PSQI分值无显著性差异,治疗后两组患者PSQI分值均有不同程度的降低;进一步进行组间两两比较,治疗2周时PSQI分值比较,差异无显著统计学意义(P>0.05),治疗4周时PSQI分值比较,研究组<对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);(3)两组治疗前后中医症状积分比较:两组治疗前组内各症状比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗2周时两组组间比较:在改善入睡困难、心中烦躁、多梦方面,差异具有显著统计学意义(P<0.05);在眠浅易醒、胸胁胀痛、喜太息、腹胀便秘方面,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗4周时两组组间比较:在改善入睡困难、眠浅易醒、心中烦躁、多梦方面,差异具有显著统计学意义(P<0.05);在胸胁胀痛、喜太息、腹胀便秘方面,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);(4)治疗前后睡眠各指标积分比较:治疗2周后两组组间比较,在入睡时间缩短方面,差异有统计学意义(P<0.05);治疗4周后两组组间比较,在入睡时间缩短、梦的程度方面,两组比较,差异有显著统计学意义(P<0.05),说明研究组在缩短入睡时间方面早期疗效优于对照组,治疗4周后在改善梦的程度方面研究组优于对照组;治疗2周时,在改善疲乏程度方面两组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05),而在治疗4周后,在改善疲乏程度方面两组组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),说明在改善疲乏程度方面,早期两组疗效相当,治疗4周后研究组疗效优于对照组。 结论:(1)不同时程睡眠剥夺会引起大鼠海马内c-fos阳性表达增多,并且这一表达量增多具有时间依从性,睡眠剥夺12h时c-fos的表达增加,随着时间的延长表达量不断地增加,且在睡眠剥夺48h时c-fos的表达达到高峰,48h后其表达又开始下降,以不同时程睡眠剥夺c-fos表达量的变化间接地反映脑内神经元细胞的动态兴奋性改变;(2)睡眠剥夺12h时NGF的阳性表达增加,说明短时间的失眠大鼠脑内NGF会发生代偿性增多,很可能是一种保护机制,发挥神经元的营养及保护作用,这一结果与先前的报道关于NGF阳性细胞的增多可能与NGF吸收的减少及NGF的逆转运到细胞胞体结果相一致;随着时间的延长,12h后表达量逐渐开始下降,说明长时间的睡眠剥夺会造成脑内的神经元活性减弱,导致神经元细胞不同程度地不可逆性受损;(3)临床研究在辨证选方论治的基础上,运用将“助卫出营”和“养营纳卫”并重的思路治疗肝气郁结型失眠患者具有其独特的治疗优势,临床疗效甚佳;在改善入睡困难、心中烦躁、多梦方面研究组的早期疗效优于对照组;在改善眠浅易醒、胸胁胀痛、喜太息、腹胀便秘方面早期疗效相当;治疗4周后在改善入睡困难、眠浅易醒、心中烦躁、多梦方面研究组的疗效优于对照组,在改善胸胁胀痛、喜太息、腹胀便秘方面疗效相当;在缩短入睡时间方面研究组的早期疗效优于对照组;治疗4周后在缩短入睡时间、梦的程度方面研究组的疗效优于对照组,在改善睡眠时间、觉醒次数方面疗效相当;在改善疲乏程度方面,两组早期疗效相当,治疗4周后研究组疗效优于对照组。患者对治疗效果十分满意,值得在临床上推广。