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目前,重金属离子污染已对人类生存环境造成了极大威胁。许多有毒重金属离子难以被微生物降解,可以通过生物链的蓄积进入人体,严重威胁着人类的身体健康及生命安全。因此,发展简单、快捷、灵敏、实用的重金属离子检测方法对控制环境污染、保护人类健康都具有重要的意义。核酸探针具有实时、快捷、稳定、直观的超灵敏等分析检测的优点,使其在医药、环境、食品等众多领域的重金属分析检测中,具有极其广阔的发展空间和应用前景。因此,在本论文的研究中,我们构建了以下三种基于核酸探针的汞离子和铅离子的检测方法:(1)基于环糊精/芘协同作用荧光检测汞离子(Hg2+)。实验设计了一条茎部含有错配胸腺嘧啶(T)碱基对,两端分别标记芘分子的DNA探针。在Hg2+存在下,探针分子通过形成T-Hg2+-T结构以及γ-环糊精的协同作用,产生芘分子的二聚体荧光信号。在优化的实验条件下,传感体系的响应信号在Hg2+浓度为0.5μM至3.0μM的范围内呈良好的线性关系,检出限为0.3μM。此方法具有良好的选择性,同时基于芘分子二聚体荧光长寿命的特点,利用时间分辨技术,有望应用于复杂生物样品Hg2+检测。(2)基于脱氧核酶(DNAzyme)免标记比色检测铅离子(Pb2+)。实验设计了一条包含DNAzyme以及富鸟嘌呤碱基(G)链的发夹型结构的核酸探针,通过Pb2+作用后,将DNAzyme中底物链释放出来,形成G-四链体引发显色反应,通过吸收信号的响应来达到检测Pb2+的目的。体系的响应信号在Pb2+浓度为5 nM至100 nM的范围内呈良好的线性关系,检出限可以达到3 nM。此外,该方法还具有良好的选择性。(3)基于脱氧核酶免标记荧光检测铅离子。利用DNAzyme可以在Pb2+的作用下,发生特异性的断裂以及SYBR Green I(SG)与双链DNA杂交体间的嵌入作用,使得互补配对的双链与单链DNA产生不同的荧光信号,对Pb2+进行检测。体系的响应信号在Pb2+浓度为1μM至8μM的范围内呈良好的线性关系,检出限可以达到0.6μM。