抗仔猪病原性腹泻卵黄抗体及其纳米粒—微球的制备与评价

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本研究以引起仔猪腹泻的几个主要病原:产肠毒素性大肠埃希氏菌(Enterotoxigenic Escherichia Coli,ETEC)、流行性腹泻病毒(Poricine epidemic diarrhoea,PEDV)及传染性胃肠炎病毒(Poorcine transmissible gastroenteritis,TGEV)为抗原免疫产蛋鸡,制备了抗仔猪病原性腹泻的特异性卵黄抗体(Egg Yolk Immunoglobulins,IgY)。利用微胶囊和纳米技术,制备了抗仔猪病原性腹泻的IgY纳米粒-微球,以达到提高IgY稳定性及靶向释放目的。并通过建立小鼠大肠杆菌腹泻动物模型探讨IgY及IgY纳米粒-微球对小鼠腹泻模型的预防作用。将产肠毒素性大肠埃希氏菌(K88,K99,987P)标准菌株混合制备成油乳苗,与流行性腹泻和传染性胃肠炎二联苗同时免疫产蛋鸡,监测抗体消长规律,结果发现两种疫苗相互间无干扰,三种抗体水平均能持续增长。收集含此IgY的高免蛋,水稀释法去脂后,以氯化钠盐析法进行纯化,加入氯化钠晶体浓度至1.5 mol/L,调节pH至4.0可以除去大部分杂蛋白,获得电泳纯的IgY。首先用离子交联法制备IgY壳聚糖纳米粒,再通过喷雾干燥进一步成球,制备IgY纳米粒-微球(IgY-NiSM)。以载药量和包封率为评价指标,采用响应面-星点设计法优化制备纳米粒配方,得出制备IgY壳聚糖纳米粒的最佳条件:壳聚糖溶液浓度为2.37mg/mL,壳聚糖与三聚磷酸钠质量比3.61:1,IgY的初始浓度为2.49mg/mL,在此条件下,纳米粒的包封率、载药量、平均粒径分别为53.28%、29.13%、495.8nm。调节喷雾干燥的技术参数,在进风温度175℃、蠕动泵进料速度30mL/min时,可制备出干燥、粉末均匀的IgY纳米粒-微球,包封率、载药量分别提高至74.15%、40.97%。电镜下其为球状颗粒,粒径为2300nm左右,在人工胃液(SGF)中2h内IgY释放度仅为8.82%,在人工肠液(SIF)中4h释放达到70%,相对活性超过55%,且在高温环境下对IgY活性具有保护作用。以临床分离致病性大肠杆菌菌株建立小鼠大肠杆菌腹泻模型,并利用该模型对IgY及其纳米粒-微球效果进行评价,结果表明IgY及其纳米粒-微球对大肠杆菌诱导的小鼠腹泻具有明显的预防作用。
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