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FOXO1作为重要的转录调控因子,通过转录调控和信号转录途径在动物的生长发育起着重要的调控作用。FOXO1转录因子的活性在多种水平上受到调节,包括基因表达水平、翻译后修饰、蛋白质的稳定性及蛋白质,蛋白质相互作用等多个层次。谢亮2010年通过全基因组关联分析发现鸡FOXO1基因上下游侧翼区的GGaluGA055291、rs13973515、GGaluGA055359和GGaluGA055379等4个SNPs与多个日龄体重和平均日增重等生长性状呈极显著相关。为了进一步证实这种相关性,本实验通过构建真核报告基因载体转染鸡胚成纤维细胞DF-1的双荧光素酶报告基因分析、凝胶阻滞实验、分型后定量PCR等实验手段研究这4个SNPs对FOXO1基因转录调控的影响。获得的主要结果如下:(1)通过构建FOXO1基因侧翼区SNPs的野生型和突变型pGL3-promoter真核表达载体转染DF-1细胞后发现GGaluGA055291中的CC基因型、GGaluGA055359中的GG基因型和GGaluGA055379中的CC基因型均极显著增强了荧光素酶的表达水平(P<0.01),在细胞学水平上证明FOXO1基因侧翼区SNPs对其转录调控有影响。(2)利用EMSA实验检测FOXO1基因侧翼区SNPs是否改变核蛋白因子结合能力,结果表明GGaluGA055291中的TT基因型核蛋白结合能力强于CC基因型,GGaluGA055359中的AA基因型核蛋白结合能力要强于GG基因型,表明FOXO1基因侧翼区SNPs改变了核蛋白因子结合位点,影响到调控基因的转录活性。(3)通过分型后荧光定量PCR反应检测了不同基因型杏花鸡70天龄胸肌和腿肌中FOXO1基因的表达量,结果显示在腿肌中,GGaluGA055291中CC基因型FOXO1基因的相对表达水平是TT基因型的1.56倍,而GGaluGA055359中GG基因型FOXO1基因的相对表达水平是AA基因型的1.53倍。但是在胸肌中FOXO1基因的相对表达量无差异。根据上述结果和相关生物网站预测,我们推论GGaluGA055291这个SNP中的CC基因型改变产生了C/EBP结合因子结合位点,而C/EBP作为一个转录增强子,使得CC基因型的FOXO1基因表达高于TT基因型;而GGaluGA055359这个SNP中的AA基因型改变产生了GR结合因子位点,GR作为一个转录阻遏子,使得AA基因型的FOXO1基因表达低于GG基因型。综上所述,我们得出结论:侧翼区GGaluGA055291和GGaluGA055359能影响FOXO1基因的转录调控水平。