论文部分内容阅读
研究背景与目的皮肤鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)是一种常见的,发病率较高的皮肤角质形成细胞来源的恶性肿瘤。SCC的病因较复杂,其发病涉及紫外线长时间照射、环境与遗传因素、病毒感染等因素。目前的常用治疗手段主要有手术切除治疗。肝脏X受体(LXRs)作为转录因子的核激素受体,发现其参与了调控多种正常细胞和肿瘤细胞的增殖情况。其可降低包括血管平滑肌细胞,子宫内膜细胞,胰岛细胞,肝细胞,角质形成细胞和淋巴细胞的增殖,还对黑素瘤、乳腺癌、肺癌、前列腺癌等多种肿瘤都有着抑制细胞增殖的作用。前期研究也已发现LXRs在皮肤中有广泛表达,但目前尚未明确LXRs在皮肤鳞癌发生发展中的具体作用。Kruppel样因子4(KLF4)作为一种目前已知的重要的蛋白质,存在于多种组织和细胞中,如广泛表达于肺、肠、皮肤、睾丸、胸膜、心肌等器官或组织。它在体内不但参与调节不同细胞的生长、分化以及凋亡等生物学过程,还参与了炎症及多种肿瘤相关的疾病的发生发展过程,其在调节细胞增殖上既有抑制肿瘤的作用也有促进肿瘤发生的作用。目前研究发现KLF4在鳞状细胞的增殖上是作为抑癌因子存在的,但具体作用机制仍有待进一步研究。鉴于LXRs及KLF4在皮肤鳞癌发生和发展中的可能作用,本实验观察了LXRs激动剂T0901317对体外人表皮鳞癌SCL-1细胞增殖和对裸鼠异体移植肿瘤生长的影响,以探讨KLF4因子在LXRs途径抑制皮肤鳞癌SCL-1细胞增殖中的作用。方法1.裸鼠皮肤鳞癌SCL-1细胞荷瘤模型构建及肿瘤生长曲线测定:皮下注射SCL-1细胞构建裸鼠荷瘤模型,给予T0901317试剂灌胃处理后测量实验组及对照组异体移植肿瘤生长数据,对比两组肿瘤的生长曲线情况。2.SCL-1细胞增殖率检测:采用CCK-8法检测不同浓度T0901317(1、10、20μmol/L)作用SCL-1细胞24、48、72h后细胞的增殖率。3.SCL-1细胞的细胞周期检测:用流式细胞术检测不同浓度T0901317(1、10、20μmol/L)作用SCL-1细胞24h后的细胞周期分布情况。4.SCL-1细胞的细胞周期相关因子的m RNA表达:RT-PCR法检测不同浓度T0901317(1、10、20μmol/L)作用SCL-1细胞24h后细胞周期相关因子PCNA、p21、p27、CCND1的基因表达变化。5.SCL-1细胞的细胞周期相关因子的蛋白表达:用Western blot检测不同浓度T0901317(1、10、20μmol/L)作用SCL-1细胞24h后细胞周期相关因子PCNA、p21、p27、CCND1以及KLF4因子的蛋白表达变化。结果1.裸鼠荷瘤实验组与对照组生长曲线可见较明显差异,实验组肿瘤体积小于对照组肿瘤体积。在体内LXRs激动剂作用可一定程度抑制肿瘤的体积大小。2.T0901317在一定范围内呈时间和浓度依赖性地抑制体外培养的表皮鳞癌SCL-1细胞增殖。3.T0901317作用于表皮鳞癌SCL-1细胞24h后,SCL-1细胞的G1期百分比上升,而S期、G2期百分比下降。4.T0901317作用于表皮鳞癌SCL-1细胞24h后,在一定浓度范围内诱导了P21的表达增加,KLF4因子蛋白的表达随药物浓度也呈增加趋势,PCNA的表达趋势与P21呈相反的趋势,而其他细胞周期相关因子表达未见明显差异。结论LXRs激动剂可以抑制体内及体外的SCL-1细胞的增殖,其可能的机制为抑制细胞周期的进行,即通过调节细胞周期负性调节因子p21的表达,导致细胞周期静息甚至停滞于G1期,从而抑制细胞增殖。并且其在作用过程中,KLF4因子可能起重要的作用,但具体机制仍需要进一步的研究阐明。